知多少
純化核酸始末
萬(wàn)事開(kāi)頭難，純化核酸作為絕大部分
分子實(shí)驗(yàn)的起始，對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的
成敗有著至關(guān)重要的影響。
微量/超微量紫外分光光度計(jì)由于可以簡(jiǎn)單快速、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠地檢測(cè)核酸濃度及蛋白質(zhì)、鹽離子殘留，得到廣大科研人員的青睞。
眾所周知，A260表示核酸吸光度OD值、A280表示蛋白質(zhì)濃度吸光度OD值、A230表示鹽離子濃度吸光度OD值，因此A260可以換算核酸濃度，A260/280表示蛋白質(zhì)殘留，A260/230表示鹽離子殘留，但這僅僅是研究人員根據(jù)大量測(cè)量結(jié)果后發(fā)現(xiàn)的規(guī)律，“約定俗成”地認(rèn)為在一定程度上可說(shuō)明DNA、RNA的純度。并不是核酸產(chǎn)量、純度鑒定的唯一標(biāo)準(zhǔn)，僅僅作為參考，也不是“金標(biāo)準(zhǔn)”。
Thermo Fisher ND-2000說(shuō)明書(shū)中重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)了檢測(cè)結(jié)果的可信度
究其原因，使用微量/超微量紫外分光光度計(jì)獲得的結(jié)果僅僅是從側(cè)面反應(yīng)核酸產(chǎn)量及純度，影響因素較多（光路、樣本量、樣本濃度、pH值、其他影響吸光度測(cè)量的離子等），測(cè)得的OD值并不一定準(zhǔn)確。同時(shí)，由于吸光度值測(cè)定物質(zhì)缺少特異性，單鏈DNA、雙鏈DNA、RNA、dNTPs、以及部分蛋白均在260nm波長(zhǎng)處存在吸收峰，單靠A260確定的濃度并不一定是真實(shí)DNA或RNA的濃度，且并不能判斷其完整性與降解情況。
那么如何判斷我們純化核酸的質(zhì)量呢？除使用微量/超微量紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)外，還需要通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳等方法，來(lái)直觀的顯示核酸的純度及完整度，并在一定程度上標(biāo)示濃度。這樣從多種方法的檢測(cè)結(jié)果中獲得的核酸產(chǎn)量、純度才是可信的。
FG實(shí)驗(yàn)圖對(duì)比
（OD測(cè)量值及相應(yīng)電泳圖）
FG評(píng)測(cè)指標(biāo)
是否有核酸產(chǎn)量、質(zhì)量檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”呢？
據(jù)我們所知，簡(jiǎn)單、快速且廉價(jià)的方法暫時(shí)是沒(méi)有的。不論是分光光度計(jì)、凝膠電泳，以及質(zhì)譜檢測(cè)，均是從不同側(cè)面反應(yīng)了溶液中核酸濃度及純度，需要互為參考得出判斷。
而最佳的評(píng)測(cè)指標(biāo)永遠(yuǎn)是后續(xù)的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，不影響反轉(zhuǎn)錄效率、PCR擴(kuò)增效率，獲得可信的擴(kuò)增產(chǎn)物、Ct值，測(cè)序獲得完整序列，就是成功的核酸提取。
綜上所述，唯比值論的觀點(diǎn)，理應(yīng)受到“以好的下游實(shí)驗(yàn)結(jié)果，作為好的提取參數(shù)”觀點(diǎn)的挑戰(zhàn)！
