無RNA酶污染：試劑盒提供的DNA-Only Column使得實(shí)驗(yàn)過程中無需額外添加RNA酶即可去除基因組DNA中的RNA，避免實(shí)驗(yàn)室遭受外源RNA酶污染。
速度快：Foregene Protease具有比同類蛋白酶更高的活性，消化樣本速度快；操作簡單。
方 便：離心操作均在常溫，無需4℃低溫離心或乙醇沉淀DNA。
安 全：無需有機(jī)試劑抽提。
質(zhì)量高：提取獲得的基因組DNA片段大、無RNA、無RNA酶、離子含量極低，能滿足各種實(shí)驗(yàn)的要求。
微量洗脫體系：可以提高基因組DNA濃度，便于下游檢測或?qū)嶒?yàn)。
產(chǎn) 品 名 稱 | 口腔拭子/血卡基因組DNA提取試劑盒 Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit |
貨 號(hào) | DE-05811 |
規(guī) 格 | 50T |
價(jià) 格 | ￥557.00 |
描 述 | 快速從口腔拭子、血斑等樣本中純化獲得高質(zhì)量的基因組DNA，試劑盒包含Foregene純化柱及試劑。 |
產(chǎn)品介紹
本試劑盒提供了高效、快速從口腔拭子、FTA Card(血斑)中純化得到較高濃度基因組DNA的方法。采用本公司特有的DNA-only硅膠膜離心柱和配方，搭配Foregene Protease，可以在80分鐘提取到較高濃度、高質(zhì)量的基因組DNA。專門設(shè)計(jì)的微小純化柱結(jié)合基因組DNA，可用微量(15 μL)洗脫體系洗脫DNA，提高獲得的基因組DNA的濃度，便于下游檢測或?qū)嶒?yàn)。試劑盒一次可處理一個(gè)或多個(gè)樣品，且純化過程不需要用到酚、氯仿等有機(jī)物抽提以及耗時(shí)的異丙醇或乙醇沉淀，操作簡捷省時(shí)。
本試劑盒離心柱采用的DNA-only硅膠膜為本公司特有新型材料，高效、特異吸附DNA，可最大限度的去除RNA、雜質(zhì)蛋白、離子及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。獲得的DNA片段大，純度高、質(zhì)量穩(wěn)定可靠，一個(gè)離心柱的最大承載量為80 μg DNA。獲得的DNA可用于酶切、PCR、Southern雜交、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
試劑盒應(yīng)用
該試劑盒適用于純化以下樣本基因組DNA：口腔拭子、FTA Card(血斑)。
純化DNA的應(yīng)用
口腔拭子/血卡基因組DNA提取試劑盒純化獲得的基因組DNA純度高，可用于常規(guī)分子生物學(xué)操作，如：酶切、PCR、Southern雜交、文庫構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。
DNA提取得率和純度
微量樣本基因組DNA的產(chǎn)量與樣本來源、保存條件、酶解程度以及操作有關(guān)，口腔拭子/血卡基因組DNA提取試劑盒提供了一種有效的獲得微量樣本基因組DNA的方法，一般一個(gè)口腔拭子可獲得0.5-3 μg的基因組DNA(與口腔拭子上含有的細(xì)胞數(shù)量有關(guān))；一個(gè)直徑為3mm的血斑可獲得0.2-0.5 μg的基因組DNA。獲得的基因組DNA純度高，其OD260/280≈1.7-1.9。
試劑盒內(nèi)容
Buffer ST1：提供組織樣本酶解環(huán)境。
ForegeneProtease：在Buffer ST1的環(huán)境下酶解組織樣本。
Buffer ST2：失活Foregene Protease，并提供DNA上柱環(huán)境。
Linear Acrylamide：減少核酸本底吸附，提高DNA洗脫效率。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白質(zhì)、RNA等雜質(zhì)。
Buffer WB：去除DNA中的殘留的鹽離子。
Buffer EB：洗脫純化柱膜上的DNA。
DNA-Only Column：特異吸附裂解產(chǎn)物中的基因組DNA。
產(chǎn)品信息
型號(hào) | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個(gè)樣品 | 制備時(shí)間 | 80 min (24個(gè)樣品) |
離心機(jī) | 臺(tái)式離心機(jī) | 組織酶解物分離 | 離心分離 |
純化柱DNA承載量 | 30 μg | 離心柱液體盛裝量 | 800 μL |
洗脫體積 | 15-30 μL | 樣本處理量 | 1根口腔拭子 1-3片直徑3mm血斑 |
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
MSDS
COA
純化柱堵塞
Answer
本試劑盒在基因組DNA提取操作步驟中，樣本酶解后沒有離心步驟直接將樣本酶解混合物上純化柱吸附DNA，有可能由于酶解不完全、樣本粘稠高等因素導(dǎo)致純化柱堵塞。
可能存在的原因如下：
1. 組織樣本酶解不完全。
建議：可適當(dāng)延長Foregene Protease處理樣本時(shí)間或者以12,000rpm (~13,400 ×g)離心5min后取上清液過柱。
2. 組織樣本用量過多或者組織較大。
建議：樣本最好不要超過1根口腔拭子；如果樣本過多請(qǐng)相應(yīng)增加Buffer ST1、Foregene Protease、Buffer ST2的用量。
3. 樣本粘稠度過高。
建議：可將樣本用10mM的Tris-HCl適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行基因組DNA的提取操作。
4. 吸取到了血卡的碎片。
建議：可適當(dāng)延長血斑(FTA Card)基因組提取第6步短暫離心時(shí)間。
提取過程中無法獲得基因組DNA可能存在的原因如下
Answer
通常有多種因素會(huì)影響基因組DNA產(chǎn)量，包括樣本來源、樣本保存條件、樣本的預(yù)處理、操作等。
可能存在的原因如下：
1. 樣本保存不當(dāng)或保存時(shí)間太長，導(dǎo)致基因組DNA降解。
建議：口腔拭子最好是新鮮取樣，不宜使用保存的拭子進(jìn)行基因組DNA提取操作；血斑樣本確保質(zhì)量合格，保存時(shí)間不宜過長。
2. 組織用量過少可能導(dǎo)致提取不到相應(yīng)的基因組DNA。
建議：按照操作指南里面的口腔拭子取樣說明進(jìn)行操作，盡量多擦拭幾次以便口腔拭子上能附著足夠的細(xì)胞進(jìn)行基因組DNA提??；對(duì)于血斑樣本提取，可適當(dāng)增加血斑剪取面積。
3. ForegeneProtease保存不當(dāng)，導(dǎo)致其活性降低或失活。
建議：確認(rèn)Foregene Protease保存條件或者更換新的Foregene Protease進(jìn)行酶解反應(yīng)。
4. 試劑盒保存不當(dāng)或存放時(shí)間太長，導(dǎo)致試劑盒里面某些組分失效。
建議：購置新的口腔拭子基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行相關(guān)操作。
5. Buffer WB沒有添加無水乙醇。
建議：確認(rèn)Buffer WB中添加正確體積的無水乙醇。
6. 洗脫液沒有正確滴加到硅膠膜上。
建議：將65℃預(yù)熱的洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
提取獲得低產(chǎn)量基因組DNA
Answer
可能存在的原因如下：
1. 樣本保存不當(dāng)或保存時(shí)間太長，導(dǎo)致基因組DNA降解。
建議：口腔拭子最好是新鮮取樣，不宜使用保存的拭子進(jìn)行基因組DNA提取操作。
2. 組織樣本用量過少，提取到的基因組DNA含量會(huì)較少。
建議：按照操作指南里面的口腔拭子取樣說明進(jìn)行操作，盡量多擦拭幾次以便口腔拭子上能附著足夠的細(xì)胞進(jìn)行基因組DNA提取。
3. ForegeneProtease保存不當(dāng)，導(dǎo)致其活性降低或失活。
建議：確認(rèn)Foregene Protease保存條件或者更換新的Foregene Protease進(jìn)行酶解反應(yīng)。
4. 洗脫液問題。
建議：請(qǐng)使用Buffer EB進(jìn)行洗脫；如果使用ddH2O或其他洗脫液，確認(rèn)洗脫液的pH值在7.0-8.5之間。
5. 洗脫液沒有正確滴加。
建議：請(qǐng)將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
6. 洗脫液體積太少。
建議：請(qǐng)按說明書上要求使用洗脫液進(jìn)行基因組DNA洗脫，最少不要低于15 μL。
提取獲得基因組DNA純度低
Answer
基因組DNA純度低會(huì)導(dǎo)致下游實(shí)驗(yàn)的失敗或效果不理想，如：酶切不開，PCR得不到目的基因片段等。
可能存在的原因如下：
1. 雜蛋白污染、RNA污染。
分析：沒有使用Buffer PW洗滌純化柱；Buffer PW洗滌純化柱沒有使用正確的離心轉(zhuǎn)速。
建議：在添加乙醇之前保證上清液中無沉淀；務(wù)必按說明書進(jìn)行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
2. 雜質(zhì)離子污染。
分析：省略了Buffer WB洗滌純化柱或者只洗滌了一次，導(dǎo)致殘留的離子污染。
建議：務(wù)必按說明書使用Buffer WB洗滌2次，以盡量去除殘留的離子。
3. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；BufferPW洗滌操作不正確，導(dǎo)致RNA酶殘留，影響下游RNA實(shí)驗(yàn)操作，如：體外轉(zhuǎn)錄等。
建議：Foregene系列核酸提取試劑盒無需額外添加RNA酶即可去除RNA，Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit里面所有試劑均無需添加RNA酶；務(wù)必按說明書進(jìn)行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
4. 乙醇?xì)埩簟?/span>
分析：Buffer WB洗滌純化柱后，沒有進(jìn)行空管離心操作。
建議：按說明書進(jìn)行正確的空管離心操作。
5. 其他雜質(zhì)污染。
分析：保存樣本或特殊樣本沒有進(jìn)行預(yù)處理。
建議：按操作說明對(duì)樣本進(jìn)行徹底的預(yù)處理。
