產(chǎn) 品 名 稱 | 多糖多酚植物種子(小型)直接PCR試劑盒 Plant Seed Direct PCR Plus Kit I | ||
貨 號 | TP-03151 | TP-03153 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價 格 | ￥1,617.00 | ￥13,593.00 | |
| 描 述 | 直接使用多糖多酚種子裂解液作為模板進(jìn)行PCR擴增，無需單獨抽提DNA，快速，靈敏度高，適合快速大規(guī)?；驒z測。 試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產(chǎn) 品 名 稱 | 多糖多酚植物種子(大中型)直接PCR試劑盒 Plant Seed Direct PCR Plus Kit II | ||
貨 號 | TP-03171 | TP-03173 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價 格 | ￥1,942.00 | ￥15,778.00 | |
| 描 述 | 直接使用多糖多酚種子裂解液作為模板進(jìn)行PCR擴增，無需單獨抽提DNA，快速，靈敏度高，適合快速大規(guī)?；驒z測。 試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品采用獨特的裂解反應(yīng)體系，能夠快速的從多糖多酚含量高的植物種子樣本(如：香蕉、棉花等)中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。為了滿足不同檢測試驗的需要，本試劑盒可以使用多種類型的樣本(如完整種子、微量組織切塊或多顆種子的磨碎樣本)進(jìn)行實驗。其中，對于還需要進(jìn)行萌發(fā)的種子樣本，可以選擇切取種胚以外的微量組織切塊(1-5mg)進(jìn)行實驗；對于需要在大量樣本中進(jìn)行抽樣檢測的實驗，可以選擇將多個樣本混合并磨碎成直徑0.5mm左右的顆粒后再進(jìn)行實驗(最低可以檢測出0.1%的目的樣本)。
裂解反應(yīng)體系釋放基因組DNA過程可以在5-10min內(nèi)完成，不需要其他去蛋白、RNA或者次生代謝產(chǎn)物的過程，即可將釋放出的微量DNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2× Seed PCR EasyTM Mix具有很強的PCR反應(yīng)抑制物耐受性，能直接以植物材料的裂解混合液為模板，進(jìn)行高效特異性擴增。該試劑包含公司專門針對直接PCR改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強劑、優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。與裂解反應(yīng)體系配合使用能夠快速簡便地對樣品進(jìn)行檢測，并具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。
D-Taq DNA polymerase是Foregene為直接PCR反應(yīng)專門研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對多種PCR反應(yīng)抑制劑具有極強的的耐受性、在各種復(fù)雜反應(yīng)體系中均能高效擴增痕量的DNA，擴增速度可達(dá)2Kb/min，特別適合進(jìn)行直接PCR反應(yīng)。
根據(jù)植物樣本差異，該產(chǎn)品分為兩個大類：植物種子直接PCR試劑盒(Plant Seed Direct PCR Kit)和多糖多酚植物種子直接PCR試劑盒(Plant Seed Direct PCR Plus Kit)。在裂解階段，考慮到不同類型的種子或組織材料在裂解過程中試劑用量差異較大，客戶可根據(jù)自己實驗材料的大小選擇相應(yīng)的植物種子(中小型)直接PCR試劑盒或植物種子(大型)直接PCR試劑盒；在PCR檢測階段，客戶也可以根據(jù)實驗需求，選用普通的2× Seed PCR EasyTM Mix或是具有防PCR擴增產(chǎn)物污染作用的2× Seed PCR EasyTM Mix(UNG)。
試劑盒應(yīng)用
適用范圍：多種植物種子。
樣本裂解釋放的DNA：僅用作PCR模板。
試劑盒可用于以下用途：轉(zhuǎn)基因種子鑒定、植物基因分型等。
試劑盒局限性
擴增片段≤1kb；超過1kb，擴增效率下降或者擴增失敗。
PCR產(chǎn)物如用于測序建議先進(jìn)行PCR產(chǎn)物純化。
PCR產(chǎn)物可能會有點突變，如用于基因克隆，請知悉。
PCR產(chǎn)物3’末端隨機加A尾。
試劑盒內(nèi)容
Buffer SSP1：提供多糖多酚植物種子裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。
Buffer SSP2：補充提供多糖多酚植物種子裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。
Buffer SP2：中和裂解產(chǎn)物，使其不影響后續(xù)PCR反應(yīng)。
2× Seed PCR EasyTM Mix：包含福際生物特別改造的Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應(yīng)時，只需將適當(dāng)?shù)牧呀饣旌弦骸⒁铩?/span>ddH2O添加到2× Leaf PCR EasyTM Mix中即可用于PCR反應(yīng)。
6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時，配搭使用試劑盒附贈的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結(jié)果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時會在泳道中有一大團(tuán)拖尾亮光，影響實驗結(jié)果。
儲存條件
全程低溫冰盒運輸，保證試劑盒Part I、Part II處于＜4℃狀態(tài)。
本試劑盒Part I保存在2-8℃。
v 試劑Buffer PS1、Buffer P2、6× DNA Loading Buffer在干燥條件下，可保存12個月；如需保存更長時間可置于2–8℃。
本試劑盒Part II保存在-20℃。
v 試劑Buffer PS2、2× Seed PCR EasyTM Mix，在-20℃條件下可保存12個月；若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內(nèi)用完)。
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
MSDS
COA
正對照、待測樣本均無條帶
Answer
在試劑盒的使用過程中往往會遇到許多問題，比如：沒有PCR擴增產(chǎn)物、PCR特異性差等，以下就分別對使用植物種子直接PCR系列試劑盒可能會遇到的問題進(jìn)行分析。建議在進(jìn)行直接PCR的同時設(shè)置陽性對照或陰性對照以便后續(xù)分析實驗結(jié)果。
1. PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。
建議：使用梯度PCR摸索PCR最佳反應(yīng)條件。
2. PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。
建議：2× Seed PCR EasyTM Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
3. 引物設(shè)計問題。
建議：嘗試重新設(shè)計引物進(jìn)行檢查。
正對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱
Answer
1. 種子中多糖多酚含量較高，裂解混合液呈棕黃色甚至棕紅色。
建議：使用多糖多酚植物種子直接PCR試劑盒(Plant Seed Direct PCR Plus Kit)。
2. 裂解液、中和液加入比例不當(dāng)，裂解混合液影響PCR體系的pH值。
建議：正常條件下，中和后的裂解混合液的pH應(yīng)該在7-8左右(普通植物種子直接PCR試劑盒，裂解產(chǎn)物和Buffer SP2嚴(yán)格按照1:1的量進(jìn)行中和；多糖多酚植物種子直接PCR試劑盒，裂解產(chǎn)物和Buffer SP2嚴(yán)格按照8:5的量進(jìn)行中和)。
3. 樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。
建議：裂解混合液可在4℃保存5天，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。
4. 裂解混合液中抑制物過多。
建議：在PCR反應(yīng)體系5-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。
5. PCR循環(huán)數(shù)不足。
建議：適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因為模板復(fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的DNA模板多5-10個循環(huán)為佳。
非特異性擴增
Answer
1. 退火溫度偏低。
建議：適當(dāng)提高退火溫度。
2. PCR循環(huán)數(shù)過多。
建議：適當(dāng)降低循環(huán)次數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。
3. 引物濃度偏高。
建議：適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時，可以在0.1-0.5μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
4. PCR模板加入量過多。
建議：配制PCR反應(yīng)體系時，適量減少模板加入量。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實驗所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。實驗時應(yīng)規(guī)范操作，避免在加樣操作中溶液倒吸或飛濺。
2. 樣本間交叉污染。
建議：每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口或與樣本直接接觸的部位浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復(fù)涮洗數(shù)次進(jìn)行清洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液后再進(jìn)行使用。
3. PCR產(chǎn)物污染。
建議：如果實驗室檢測同類型樣本多，最好使用UNG防PCR產(chǎn)物污染系統(tǒng)的試劑盒進(jìn)行實驗。
