產(chǎn)品介紹

本產(chǎn)品采用獨(dú)特的裂解反應(yīng)體系，能夠快速的從多糖多酚含量高的植物種子樣本(如：香蕉、棉花等)中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)，因此特別適合大規(guī)模基因檢測(cè)。為了滿足不同檢測(cè)試驗(yàn)的需要，本試劑盒可以使用多種類型的樣本(如完整種子、微量組織切塊或多顆種子的磨碎樣本)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其中，對(duì)于還需要進(jìn)行萌發(fā)的種子樣本，可以選擇切取種胚以外的微量組織切塊(1-5mg)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；對(duì)于需要在大量樣本中進(jìn)行抽樣檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)，可以選擇將多個(gè)樣本混合并磨碎成直徑0.5mm左右的顆粒后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(最低可以檢測(cè)出0.1%的目的樣本)。

裂解反應(yīng)體系釋放基因組DNA過(guò)程可以在5-10min內(nèi)完成，不需要其他去蛋白、RNA或者次生代謝產(chǎn)物的過(guò)程，即可將釋放出的微量DNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。

2× Seed PCR Easy^TM Mix具有很強(qiáng)的PCR反應(yīng)抑制物耐受性，能直接以植物材料的裂解混合液為模板，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增。該試劑包含公司專門針對(duì)直接PCR改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl₂、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。與裂解反應(yīng)體系配合使用能夠快速簡(jiǎn)便地對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，并具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。

2× Seed PCR Easy^TM Mix(UNG)在2× Seed PCR Easy^TM Mix的基礎(chǔ)上用dUTP替代了dTTP，并同時(shí)加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反應(yīng)前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物，UNG酶對(duì)不含有尿嘧啶的模板不會(huì)造成任何影響，從而保證擴(kuò)增的特異性和準(zhǔn)確性，防止了大規(guī)?；驒z測(cè)時(shí)可能出現(xiàn)的PCR產(chǎn)物污染問(wèn)題。

D-Taq DNA polymerase是Foregene為直接PCR反應(yīng)專門研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對(duì)多種PCR反應(yīng)抑制劑具有極強(qiáng)的的耐受性、在各種復(fù)雜反應(yīng)體系中均能高效擴(kuò)增痕量的DNA，擴(kuò)增速度可達(dá)2Kb/min，特別適合進(jìn)行直接PCR反應(yīng)。

根據(jù)植物樣本差異，該產(chǎn)品分為兩個(gè)大類：植物種子直接PCR試劑盒(Plant Seed Direct PCR Kit)和多糖多酚植物種子直接PCR試劑盒(Plant Seed Direct PCR Plus Kit)。在裂解階段，考慮到不同類型的種子或組織材料在裂解過(guò)程中試劑用量差異較大，客戶可根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)材料的大小選擇相應(yīng)的植物種子(中小型)直接PCR試劑盒或植物種子(大型)直接PCR試劑盒；在PCR檢測(cè)階段，客戶也可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選用普通的2× Seed PCR Easy^TM Mix或是具有防PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染作用的2× SeedPCR Easy^TM Mix(UNG)。

試劑盒應(yīng)用

適用范圍：多種多糖多酚植物種子。

樣本裂解釋放的DNA：僅用作PCR模板。

試劑盒可用于以下用途：轉(zhuǎn)基因種子鑒定、植物基因分型等。

試劑盒局限性

擴(kuò)增片段≤1kb；超過(guò)1kb，擴(kuò)增效率下降或者擴(kuò)增失敗。

UNG防PCR產(chǎn)物污染體系得到的PCR產(chǎn)物請(qǐng)勿用于基因克隆或測(cè)序。

PCR產(chǎn)物3’末端隨機(jī)加A尾。

試劑盒內(nèi)容

Buffer SSP1：提供多糖多酚植物種子裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。

Buffer SSP2：補(bǔ)充提供多糖多酚植物種子裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。

Buffer SP2：中和裂解產(chǎn)物，使其不影響后續(xù)PCR反應(yīng)。

2× Seed PCR Easy^TM Mix(UNG)：在2× Leaf PCR Easy^TM Mix的基礎(chǔ)上用dUTP替代了dTTP，并同時(shí)加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶，從而能夠有效防止PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染。包含福際生物特別改造的D-Taq DNA Polymerase、UDG、dNTPs、MgCl₂、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應(yīng)時(shí)，只需將適當(dāng)?shù)牧呀饣旌弦?、引物?/span>ddH₂O添加到2×Seed PCR Easy^TM Mix(UNG)中即可用于PCR反應(yīng)。

6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，配搭使用試劑盒附贈(zèng)的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結(jié)果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時(shí)會(huì)在泳道中有一大團(tuán)拖尾亮光，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

儲(chǔ)存條件

全程低溫冰盒運(yùn)輸，保證試劑盒Part I、Part II處于＜4℃狀態(tài)。

本試劑盒Part I保存在2-8℃。

v 試劑Buffer SP1、Buffer SP2、6× DNA Loading Buffer在干燥條件下，可保存12個(gè)月；如需保存更長(zhǎng)時(shí)間可置于2–8℃。

本試劑盒Part II保存在-20℃。

v  試劑2× Seed PCR Easy^TM Mix(UNG)，在-20℃條件下可保存12個(gè)月；若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內(nèi)用完)。

操作流程