產(chǎn) 品 名 稱 | 培養(yǎng)細胞總RNA提取試劑盒 Cell Total RNA Isolation Kit | |
貨 號 | RE-03111 | RE-03113 |
規(guī) 格 | 50T | 200T |
價 格 | ￥718.00 | ￥2,449.00 |
描 述 | 快速從多種培養(yǎng)細胞中純化高質(zhì)量總RNA，試劑盒包含Foregene純化柱及試劑。 | |
產(chǎn)品介紹
該試劑盒采用本公司研制的離心柱和配方，可以高效率的從96、24、12、6孔板培養(yǎng)細胞中提取得到高純度高質(zhì)量的總RNA。試劑盒提供高效的DNA-Cleaning Colunm，能輕松的讓上清液和細胞裂解物分離并吸附除去基因組DNA，操作簡便、省時；該RNA-only Column能高效的結(jié)合RNA，搭配獨特的配方，可以同時處理大量樣品。
全體系RNase-Free，使得提取的RNA無降解；Buffer RW1、Buffer RW2緩沖液洗滌體系，使得獲得的RNA無蛋白、無DNA、無離子、無有機化合物污染。
試劑盒應(yīng)用
該試劑盒適用于從96、24、12、6孔板培養(yǎng)細胞總RNA提取純化。
純化RNA的應(yīng)用
培養(yǎng)細胞總RNA提取試劑盒提取得到的總RNA可用于各種下游分子實驗，例如：cDNA合成，RT-PCR、Real Time PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯、芯片分析、PolyA篩選、分子克隆和RNase保護分析等。
RNA提取得率和純度
使用培養(yǎng)細胞總RNA提取試劑盒純化得到的RNA，其產(chǎn)量與細胞初始量、新鮮程度、細胞保存時間以及操作相關(guān)。以下是使用該試劑盒提取RNA，幾種培養(yǎng)細胞RNA得率與純度，實際操作中，可能與該數(shù)據(jù)有些許出入。
細胞類型 | RNA得率(106) | OD260/280 | OD260/230 |
MKN-74 | 15-20 μg | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
293T | 14-18 μg | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
SKBR3 | 15-20 μg | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
儲存條件
常溫(15–25℃)，有效期為 24個月。
試劑盒內(nèi)容
Buffer cRL1：提供細胞裂解所需的環(huán)境。
Buffer cRL2：提供 RNA 的特異上柱環(huán)境。
Buffer RW1：去除 RNA 中的蛋白質(zhì)、DNA 等雜質(zhì)。
Buffer RW2：去除 RNA 中殘留的鹽離子。
RNase-Free ddH2O：洗脫純化柱膜上的總 RNA。
DNA-Cleaning Column：特異吸附細胞裂解產(chǎn)物中的 DNA，并過濾除去裂解產(chǎn)物 中的固體雜質(zhì)。
RNA-only Column：特異吸附上通過 DNA-Cleaning Column 濾液中的總 RNA。
產(chǎn)品信息
型號 | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個樣品 | 制備時間 | ~11 min (24個樣品) |
離心機 | 臺式離心機 | 細胞裂解物分離 | 離心分離 |
純化柱RNA承載量 | 60 μg | 離心柱液體盛裝量 | 800 μL |
洗脫體積 | 20-50 μL | 細胞樣本處理量 | 104—106 cells |
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻
Wang D, Li S, Zhao Z,et al. Engineering a Second-Order DNA Logic-Gated Nanorobot to Sense and Release on Live Cell Membranes for Multiplexed Diagnosis and SynergisticTherapy. Angew Chem Int Ed Engl. 2021 Jul 12;60(29):15816-15820. doi: 10.1002/anie.202103993.
IF:15.336(Foregene #RE-03111)
Liwei Fu, Pinxue Li, Junyao Zhu, et al.Tetrahedral framework nucleic acids promote the biological functions and related mechanism of synovium-derived mesenchymal stem cells and show improved articular cartilage regeneration activity in situ,Bioactive Materials,2021,ISSN 2452-199X.doi:10.1016/j.bioactmat.2021.07.028.
IF:14.593(Foregene #RE-03111)
Xu Y, Niu Y, Wu B, et al. Extended-release of therapeutic microRNA via a host-guest supramolecular hydrogel to locally alleviate renal interstitial fibrosis. Biomaterials. 2021 Aug;275:120902. doi: 10.1016/j.biomaterials.
IF:12.479(Foregene #RE-03111)
Wang C, Li X, Ning W, Gong S, et al. Multi-omic profiling of plasma reveals molecular alterations in children with COVID-19. Theranostics. 2021 Jul 6;11(16):8008-8026. doi: 10.7150/thno.61832.
IF:11.556((Foregene #RE-03111)
MSDS
COA
提取不到RNA或者RNA產(chǎn)量低
Answer
通常會有多種因素影響回收效率，比如：樣本RNA含量、操作方法、洗脫體積等。
1. 操作過程中進行了冰浴或低溫(4°C)離心。
建議：全程常溫(15-25°C)操作，切勿冰浴和低溫離心。
2. 樣本保存不當或樣本保存時間過久。
建議：樣本保存于-80℃或凍存于液氮中，并避免反復(fù)凍融使用；盡量采用新鮮培養(yǎng)的細胞進行RNA提取操作。
3. 樣本裂解不充分。
建議：在細胞裂解時，請保證細胞完全裂解。
4. 洗脫液添加不正確。
建議：確認RNase-Free ddH2O滴加到了純化柱膜中間位置。
5. Buffer cRL2或Buffer RW2中沒有添加正確體積的無水乙醇。
建議：請按照說明書，在試劑盒使用前，Buffer cRL2和Buffer RW2中添加正確體積的無水乙醇并混勻。
6. 細胞樣本用量不合適。
建議：每250μl Buffer cRL1最多使用106個細胞，細胞量過多會導(dǎo)致RNA提取得率及純度降低。
7. 洗脫體積不合適或洗脫不徹底。
建議：純化柱的洗脫液體積為20-50μl；若洗脫效果并不理想，建議在加入預(yù)熱的RNase-Free ddH2O后，延長室溫放置的時間，例如放置5-10min。
8. 純化柱在Buffer RW2洗滌之后有乙醇殘留。
建議：如果在Buffer RW2洗滌，空管離心1min后還有乙醇殘留，可以將空管離心操作的時間增加至2min，或?qū)⒓兓糜谑覝?/span>5min，以充分除去殘留乙醇。
純化獲得的RNA有降解
Answer
純化得到的RNA的質(zhì)量和樣本的保存、RNase污染、操作等因素有關(guān)。
1. 細胞樣本沒有及時保存。
建議：細胞在收集后若不及時使用，請立即低溫保存于-80℃或者液氮中。提取RNA請盡量使用新近采取的細胞樣本。
2. 細胞樣本反復(fù)凍融。
建議：樣本保存時，最好分成小份保存，使用時取出其中一份即可，避免樣本的反復(fù)凍融導(dǎo)致RNA的降解。
3. 操作間有RNase引入或沒有佩戴一次性手套、口罩等。
建議：RNA提取實驗最好在單獨的RNA操作間進行，并在實驗前清理好實驗桌，實驗時佩戴一次性手套、口罩，最大程度上避免RNase引入導(dǎo)致的RNA降解。
4. 試劑在使用過程中被RNase污染。
建議：更換新的Cell Total RNAIsolation Kit進行相關(guān)實驗。
5. RNA操作時所用的離心管、槍頭等有RNase污染。
建議：確認RNA提取時所用到的離心管、槍頭、移液器等都是RNase-Free。
純化獲得的RNA影響下游實驗
Answer
經(jīng)純化柱純化的RNA，如果鹽離子、蛋白質(zhì)含量過多會影響下游實驗，比如：逆轉(zhuǎn)錄、Northern Blot等。
1. 洗脫后的RNA有鹽離子殘留。
建議：確認Buffer RW2中添加了正確體積的乙醇，并按操作說明的離心轉(zhuǎn)速進行2次純化柱洗滌；如果還有鹽離子殘留，可在純化柱加入Buffer RW2后，室溫放置5min，再進行離心操作，以最大程度上去除鹽離子污染。
2. 洗脫后的RNA有乙醇殘留。
建議：確認Buffer RW2洗滌后，按操作說明的離心轉(zhuǎn)速進行空管離心操作；如果還有乙醇殘留，可以將空管離心操作的時間增加至2min，或者在空管離心后在室溫放置5min，以最大程度上去除乙醇殘留。
