產(chǎn) 品 名 稱 | 植物總RNA提取試劑盒 Plant Total RNA Isolation Kit | |
貨 號 | RE-05011 | RE-05014 |
規(guī) 格 | 50T | 200T |
價 格 | ￥787.00 | ￥2,643.00 |
描 述 | 快速從多種多糖多酚含量低的植物樣本中純化高質(zhì)量總RNA，試劑盒包含Foregene純化柱及試劑。 | |
產(chǎn)品介紹
該試劑盒采用本公司研制的離心柱和配方，可以從各種多糖多酚含量低的植物組織中高效率的提取得到高純度高質(zhì)量的總RNA；如果植物樣本多糖多酚，建議使用Plant Total RNA Isolation Kit Plus以得到更好的RNA提取效果。提供DNA-CleaningColumn能輕松的讓上清液和組織裂解物分離，去除樣品中的DNA，操作簡便、省時。
全體系RNase-Free，使得提取的RNA無降解；BufferPRW1、Buffer PRW2緩沖液洗滌體系，使得獲得的RNA純度極高。
試劑盒應用
該試劑盒適用于多糖多酚含量低的新鮮或凍存的植物組織樣本(尤其是新鮮植物葉片組織)總RNA的提取純化。
純化RNA的應用
植物總RNA提取試劑盒提取得到的總RNA可用于各種下游分子實驗，例如：cDNA合成，RT-PCR、Real Time PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯、芯片分析、PolyA篩選、分子克隆和RNase保護分析等。
RNA提取得率和純度
使用植物總RNA提取系列試劑盒可以從多種植物組織中純化得到的RNA，其產(chǎn)量與植物樣本本身、樣本初始量、樣本新鮮程度、樣本保存時間以及操作相關(guān)。以下是使用該試劑盒提取50mg各種植物樣本RNA的得率與純度，實際操作中，可能與該數(shù)據(jù)有出入。
新鮮幼嫩葉片50mg | 總RNA產(chǎn)量(μg) | OD260/OD280 | OD260/OD230 |
煙草 | 27-30 | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
番茄 | 32-35 | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
大豆 | 31-34 | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
玉米 | 15-17 | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
油菜 | 8-10 | 1.8-2.1 | 1.8-2.0 |
水稻 | 15-17 | 1.8-2.1 | 1.8-2.1 |
注意：以上數(shù)據(jù)均得自于植物新鮮葉片，若是植物葉片較老，或是植物其他部位(如葉脈、根莖等)，抑或是樣本保存時間過久，RNA的得率或低于上表中數(shù)據(jù)。
儲存條件
常溫(15–25℃)，有效期為 24個月。
試劑盒內(nèi)容
Buffer PRL1：提供植物組織裂解所需的環(huán)境
Buffer PRL2：提供 RNA 的特異上柱環(huán)境。
Buffer PRW1：去除 RNA 中的蛋白質(zhì)、DNA 等雜質(zhì)。
Buffer PRW2：去除 RNA 中殘留的鹽離子。
RNase-Free ddH2O：洗脫純化柱膜上的總 RNA。
DNA-Cleaning Column：特異吸附組織裂解產(chǎn)物中的 DNA，并過濾除去裂解產(chǎn)物 中的固體雜質(zhì)。
RNA-only Column：特異吸附上通過 DNA-Cleaning Column 濾液中的總 RNA。
產(chǎn)品信息
型號 | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個樣品 | 制備時間 | ~20 min (24個樣品) |
離心機 | 臺式離心機 | 植物組織裂解物分離 | 離心分離 |
純化柱RNA承載量 | 160 μg | 離心柱液體盛裝量 | 800 μL |
洗脫體積 | 50-200 μL | 植物樣本處理量 | 50 mg |
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻
Transcriptomesequencing analyses reveals mechanisms of eliminated russet by applying GA3andCPPU on ‘Shine Muscat’ grape
Yanshuai Xu, Xudong Hou Jiao Feng,Muhammad Khalil-Ur-Rehman, JianminTao
南京農(nóng)業(yè)大學園藝學院果樹生物技術(shù)實驗室
Scientia Horticulturae ( IF 1.76 ) Pub Date : 2019-05-10, DOI：10.1016/j.scienta.2019.02.048
文章鏈接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304423819301256#!
AaMYB3 interacts with AabHLH1 to regulate proanthocyanidin accumulationin Anthurium andraeanum (Hort.)—another strategy to modulate pigmentation
Chonghui Li, Jian Qiu, Surong Huang, Junmei Yin & Guangsui Yang
中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶作物遺傳資源研究所/農(nóng)業(yè)部南方作物基因資源與種質(zhì)改良重點實驗室
Horticulture Research ( IF 3.368 ) Pub Date : 2019-01-01, DOI：10.1038/s41438-018-0102-6
文章鏈接：https://www.nature.com/articles/s41438-018-0102-6
Occurrence of cucumber mosaic virus subgroup II and its geneticdiversity in Sichuan, southwest of China
Chunyan Fei, Zhenpeng Xu, Lijuan Chen, Wenshan Zou, Rui Lv, Honghui Lin, DehuiXi
四川大學生命科學學院生物資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點實驗室
Journal of Plant Pathology ( IF 0.944 ) PubDate : 2018-10, DOI：10.1007/s42161-018-0087-x
文章鏈接：https://link.springer.com/article/10.1007/s42161-018-0087-x
Identification, characterization and expression analysis of genesinvolved in steroidal saponin biosynthesis in Dracaena cambodiana
Jia-Hong Zhu, Hui-Liang Li, Dong Guo, Ying Wang, Hao-Fu Dai, Wen-Li Mei,Shi-Qing Peng
中國熱帶農(nóng)業(yè)科學研究院熱帶作物生物技術(shù)重點實驗室
Journal of Plant Research ( IF 2.0 ) PubDate : 2018-05, DOI：10.1007/s10265-017-1004-7
文章鏈接：https://link.springer.com/article/10.1007/s10265-017-1004-7
The mining and evolutionary investigation of AP2/ERF genes in pear(Pyrus)
Xiaolong Li, Shutian Tao, Shuwei Wei, Meiling Ming，Xiaosan Huang，Shaoling Zhang， Jun Wu
南京農(nóng)業(yè)大學梨工程技術(shù)研究中心
國家作物遺傳與種質(zhì)改良重點實驗室
BMC Plant Biology ( IF 3.93 ) PubDate : 2018-03-20 , DOI：10.1186/s12870-018-1265-x
文章鏈接：https://bmcplantbiol.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12870-018-1265-x
Genome-wide characterization, evolution, and expression analysis of theleucine-rich repeat receptor-like protein kinase (LRR-RLK) gene family inRosaceae genomes
Jiangmei Sun, Leiting Li, Peng Wang, Shaoling Zhang and Juyou Wu
南京農(nóng)業(yè)大學梨工程技術(shù)研究中心
國家作物遺傳與種質(zhì)改良重點實驗室
BMC Genomics ( IF 3.729 ) PubDate : 2017-10-10, DOI：10.1186/s12864-017-4155-y
文章鏈接：https://bmcgenomics.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12864-017-4155-y
Genome-wide identification of the MADS-box transcription factor familyin pear (Pyrus bretschneideri) reveals evolution and functional divergence.
Runze?Wang, Meiling?Ming, Jiaming?Li, Dongqing?Shi, Xin?Qiao, Leiting?Li,Shaolin Zhang, Jun?Wu
中國南京農(nóng)業(yè)大學梨工程技術(shù)研究中心
國家農(nóng)作物遺傳與種質(zhì)改良重點實驗室
Peerj ( IF 2.177 ) Pub Date : 2017-09-11, DOI：10.7717/peerj.3776
文章鏈接：https://peerj.com/articles/3776/
Comparative RNA-seq based transcriptomic analysis of bud dormancy ingrape
Muhammad Khalil-Ur-Rehman, Long Sun, Chun-Xia Li, Muhammad Faheem, Wu Wang andJian-Min Tao
南京農(nóng)業(yè)大學作物遺傳與種質(zhì)改良國家重點實驗室
BMC Plant Biology ( IF 3.964 ) PubDate : 2017-01-19, DOI：10.1186/s12870-016-0960-8
文章鏈接：https://bmcplantbiol.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12870-016-0960-8
Selection of Suitable Reference Genes for RT-qPCR Normalization underAbiotic Stresses and Hormone Stimulation in Persimmon (Diospyros kaki Thunb)
Peihong Wang, Aisheng Xiong, Zhihong Gao, Xinyi Yu, Man Li, Yingjun Hou, ChaoSun,Shenchun Qu
南京農(nóng)業(yè)大學園藝學院
Plos One ( IF 4.411 ) PubDate : 2016-08-11, DOI：10.1371/journal.pone.0160885
文章鏈接：https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0160885
First Report of Papaya Ringspot Virus on Snow Pea in China
L.Zhu, Z.P. Xu, C.Y. Fei and D.H. Xi
四川大學生命科學學院生物資源與生態(tài)環(huán)境教育部重點實驗室
Journal of Plant Pathology ( IF 1.038 ) Pub Date : 2016, DOI：10.4454/jpp.v98i3.3764
文章鏈接：http://www.sipav.org/main/jpp/index.php/jpp/article/view/3764/0
MSDS
COA
離心柱發(fā)生堵塞
Answer
離心柱發(fā)生堵塞之后會造成RNA得率降低甚至不能純化得到RNA，同時提起得到的RNA質(zhì)量低下。
常見原因分析：
1. 樣本破碎不徹底。
樣本破碎不徹底會使DNA-Cleaning Column發(fā)生堵塞，同時會影響RNA得率及質(zhì)量。我們建議在進行樣本破碎的時候，在足量的液氮中快速研磨操作，盡量破碎樣本細胞壁、細胞膜等組織。對于多酚多糖的植物樣本，我們建議您使用PlantTotal RNA Isolation Kit Plus。
2. 吸取DNA-Cleaning Column分離后的上清液時，吸入了可能的細胞碎片沉淀物。
吸取的細胞碎片沉淀物會使在進行RNA吸附操作時(見操作步驟第5步、多糖多酚操作步驟第6步)，將會堵塞RNA-Only Column。我們建議在吸取該上清時一定要小心謹慎，以避免細胞碎片被吸取。
3. 樣本初始量過多。
樣本使用量過多將會造成樣本破碎不完全或者Buffer PRL1或Buffer PSL1裂解細胞時不完全，導致純化操作是純化柱堵塞。PlantTotal RNA Isolation Kit每單次純化操作樣本的初始最大量為50mg。對于多酚多糖的植物樣本，我們建議您試用Plant Total RNAIsolation Kit Plus。
4. 離心機的溫度過低。
整個RNA分離純化除了液氮破碎樣本組織外，所有的步驟均在常溫(20-25℃)進行。有些低溫離心機的溫度低于20℃，可能會造成DNA-Cleaning Column和(或)RNA-only Column的堵塞。如果發(fā)生這種現(xiàn)象，請將離心機溫度設置到20-25℃，并將裂解混合物和(或)添加了乙醇分離上清預熱到37℃。
提取不到RNA或者RNA產(chǎn)量低
Answer
通常會有多種因素影響回收效率，比如：樣本RNA含量、操作方法、洗脫體積等。
常見原因分析：
1. 操作過程中進行了冰浴或低溫(4°C)離心。
建議：全程常溫(15-25°C)操作，切勿冰浴和低溫離心。
2. 樣本保存不當或樣本保存時間過久導致RNA已經(jīng)降解。
建議：新采集的樣本應立即放入液氮中速凍，之后長期保存于-80°C并避免樣本的反復凍融；或者將樣本立即浸泡在RNA穩(wěn)定劑RNAlater溶液中(動物樣本)。
3. 樣本破碎裂解不充分導致純化柱堵塞。
建議：在組織研磨時，請保證組織充分研磨，并在研磨完成后迅速轉(zhuǎn)移至預先準備好的Buffer PRL1或Buffer PSL1(確認已添加正確比例的β-ME，見操作步驟第1步)中。
4. 洗脫液添加不正確。
建議：確認RNase-Free ddH2O滴加到了純化柱膜中間位置。
5. Buffer PRL2、Buffer PSL2或Buffer PRW2中沒有添加正確體積的無水乙醇。
建議：請按照說明書，在試劑盒使用前，Buffer PRL2、Buffer PSL2和Buffer PRW2中添加正確體積的無水乙醇并混勻。
6. 組織樣本用量不合適。
建議：每500μl Buffer PRL1或Buffer PSL1使用組織量為50mg，組織使用過多會導致RNA提取量降低并且得到的RNA純度也會降低。我們強烈建議每單次RNA提取操作，樣本初始用量一定不要超過50mg。
7. 洗脫體積不合適或洗脫不徹底。
建議：純化柱的洗脫液體積為50-200μl；若洗脫效果并不理想，建議在加入預熱的RNase-Free ddH2O后，延長室溫放置的時間，例如放置5-10min。
8. 純化柱在Buffer PRW2洗滌之后有乙醇殘留。
建議：如果在Buffer PRW2洗滌，空管離心1min后還有乙醇殘留，可以將空管離心操作的時間增加至2min，或?qū)⒓兓糜谑覝?/span>5min，以充分除去殘留乙醇。
9. 試劑盒使用不正確。
建議：對于多酚多糖的植物樣本，使用普通的試劑盒如Plant Total RNA Isolation Kit可能不能獲得理想的RNA樣品，我們建議您使用Plant Total RNA IsolationKit Plus，這是我們專門針對多酚多糖植物樣本而研制的專門用于提取多酚多糖類植物樣本RNA的試劑盒。
OD260/OD280值偏低
Answer
ddH2O進行RNA洗脫，并用于分光光度計讀數(shù)時會時OD260/OD280值偏低。我們建議如果要得到相對正確的OD260/OD280值，使用pH7.5 10mM Tris-HCl(而不是RNase-Free ddH2O洗脫RNA)，具體見第十九頁的“RNA濃度及純化檢測”。
純化獲得的RNA有降解
Answer
純化得到的RNA的質(zhì)量和樣本的保存、RNase污染、操作等因素有關(guān)。
常見原因分析：
1. 組織樣本采集后沒有及時保存。
建議：組織樣本在收集后若不及時使用，請立即低溫保存于液氮中或經(jīng)液氮速凍后立即轉(zhuǎn)移至-80℃長期保存，或者將樣本立即浸泡在RNA穩(wěn)定劑RNAlater溶液中(動物樣本)。提取RNA請盡量使用新近采取的組織樣本。
2. 組織樣本反復凍融。
建議：組織樣本保存時，最好剪成小段保存，使用時取出其中一部分即可，避免樣本的反復凍融導致RNA的降解。
3. 操作間有RNase引入或沒有佩戴一次性手套、口罩等。
建議：RNA提取實驗最好在單獨的RNA操作間進行，并在實驗前清理好實驗桌，實驗時佩戴一次性手套、口罩，最大程度上避免RNase引入導致的RNA降解。
4. 試劑在使用過程中被RNase污染。
建議：更換新的植物總RNA提取系列試劑盒進行相關(guān)實驗。
5. RNA操作時所用的離心管、槍頭等有RNase污染。
建議：確認RNA提取時所用到的離心管、槍頭、移液器等都是RNase-Free。
