產(chǎn)品名稱 | 肝素抗凝血直接PCR試劑盒-防PCR產(chǎn)物污染體系 Blood SuperDirectTM PCR Kit(Heparin)-UNG | ||
貨 號 | TP-04221 | TP-04223 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價 格 | ￥1,114.00 | ￥7,525.00 | |
| 描 述 | 直接使用肝素抗凝全血作為模板進行PCR擴增，靈敏度高、擴增效率高，增加了UNG防污染體系，杜絕假陽性；試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品采用獨特的PCR緩沖液體系，無需DNA提取或樣品處理即可以全血樣本為模板進行直接PCR。EDTA、Heparin抗凝全血以及含有血液的采集卡(如Whatman 903?和 FTA?采血卡)均可直接用于PCR擴增鑒定，極大的縮短了檢測時間。本試劑盒提供的2× SuperEasyTM Mix具有很強抑制物耐受性，人血作為PCR模板最大加入量可達PCR體系的45%，鼠血的可達20%，可以靈敏的擴增血液樣本中基因組和外源目的DNA片段。
2× SuperEasyTM Mix-Heparin包含本公司特有的Foregene D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、Taq Reaction Buffer、PCR反應(yīng)增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑。
2× SuperEasyTM Mix(UNG)在2× SuperEasyTM Mix的基礎(chǔ)上用dUTP替代了dTTP，并同時加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反應(yīng)前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物，UNG酶對不含有尿嘧啶的模板不會造成任何影響，從而保證擴增的特異性和準確性，防止了大規(guī)模基因檢測時可能出現(xiàn)的PCR產(chǎn)物污染問題。
D-Taq DNA polymerase是Foregene為直接PCR反應(yīng)專門研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對多種PCR反應(yīng)抑制劑具有極強的的耐受性、在各種復雜反應(yīng)體系中均能高效擴增痕量的DNA，擴增速度可達2Kb/min，特別適合進行直接PCR反應(yīng)。
根據(jù)所用抗凝劑的不同，該產(chǎn)品分為兩個大類：EDTA抗凝全血直接PCR試劑盒系列(Blood SuperDirectTM PCR Kit-EDTA)和Heparin抗凝全血直接PCR試劑盒系列(Blood SuperDirectTM PCR Kit-Heparin)；也可以根據(jù)實驗需要選擇相應(yīng)的試劑盒。
試劑盒應(yīng)用
該試劑盒專用于肝素抗凝全血直接PCR鑒定。(包括：人血、鼠血、雞血、鳥血、牛血、狗血等)。
試劑盒局限性
擴增片段≤1kb；超過1kb，擴增效率下降或者擴增失敗。
UNG防PCR產(chǎn)物污染體系得到的PCR產(chǎn)物請勿用于基因克隆或測序。
PCR產(chǎn)物3’末端隨機加A尾。
試劑盒內(nèi)容
2× SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin：在2× SuperEasyTM Mix-EDTA的基礎(chǔ)上用dUTP替代了dTTP，并同時加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶，從而能夠有效防止PCR擴增產(chǎn)物污染。包含福際生物特別改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應(yīng)時，只需將適當?shù)目鼓⒁铩?/span>ddH2O添加到相應(yīng)的2× SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin中即可用于PCR反應(yīng)。
6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進行瓊脂糖凝膠電泳時，配搭使用試劑盒附贈的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結(jié)果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時會在泳道中有一大團拖尾亮光，影響實驗結(jié)果。
儲存條件
全程低溫冰盒運輸，保證試劑盒處于＜4℃狀態(tài)。
本試劑盒保存在-20℃。
v 2× SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin，若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內(nèi)用完)。
v 6× DNA Loading Buffer，可置于4℃或-20℃長期保存。
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻
MSDS
COA
正對照、待測樣本均無條帶
Answer
在試劑盒的使用過程中往往會遇到許多問題，比如：沒有PCR擴增產(chǎn)物、PCR特異性差等，以下就分別對使用血液直接PCR系列試劑盒可能會遇到的問題進行分析。建議在進行直接PCR的同時設(shè)置陽性對照或陰性對照以便后續(xù)分析實驗結(jié)果。
1. PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。
建議：使用梯度PCR摸索PCR最佳反應(yīng)條件。
2. PCR試劑保存不當失去活性。
建議：2× SuperEasyTM Mix系列PCR Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
3. 引物設(shè)計問題。
建議：嘗試重新設(shè)計引物進行檢查。
正對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱
Answer
1. 血液樣本保存不當，基因組DNA降解。
建議：抗凝全血可在4℃保存2-8天，需長時間保存可將樣本置于在-20℃或-70℃凍存，并避免反復凍融。
2. PCR條件沒有使用正確。
建議：請仔細確認2× SuperEasyTM Mix的類型，對應(yīng)相應(yīng)的PCR條件進行PCR擴增。
3. 模板加入量不適合。
建議：可在PCR體系10%-30%范圍內(nèi)優(yōu)化血液加入量；若是擴增血液樣本中的病毒或細菌DNA片段，可將模板量增加至30%-40%。
4. PCR循環(huán)數(shù)不足。
建議：適當增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因為模板復雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的DNA模板多5-10個循環(huán)為佳。
非特異性擴增
Answer
1. 退火溫度偏低。
建議：適當提高退火溫度?；?qū)ν嘶饻囟茸鲆粋€梯度摸索。
2. PCR循環(huán)數(shù)過多。
建議：適當降低循環(huán)次數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。
3. 引物濃度偏高。
建議：適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時，可以在0.1-0.5μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
4. 模板加入量過多。
建議：將模板加入量控制在10-20%。反應(yīng)效性能較差時，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實驗所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。
2. PCR產(chǎn)物污染。
建議：如果實驗室檢測同類型樣本多，最好使用UNG防PCR產(chǎn)物污染系統(tǒng)的試劑盒進行實驗。
