產(chǎn)品名稱 | 多糖多酚植物葉片直接PCR試劑盒 Plant Leaf Direct PCR Plus Kit | ||
貨 號(hào) | TP-02131 | TP-02133 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價(jià) 格 | ￥1,042.00 | ￥6,796.00 | |
| 描 述 | 直接使用多糖多酚植物葉片裂解液作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，無需單獨(dú)抽提DNA，快速，靈敏度高，適合快速大規(guī)?；驒z測；試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品采用獨(dú)特的裂解緩沖液體系，能夠快速的從多糖多酚含量高的植物(如：棉花、香蕉等)葉片樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)。裂解緩沖液處理葉片時(shí)，葉片無需研磨或剪碎處理，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。
裂解緩沖液釋放基因組DNA過程可以在5-10min內(nèi)完成，不需要其他去蛋白、RNA或者次生代謝產(chǎn)物的過程，即可將釋放出的微量DNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2× Leaf PCR EasyTM Mix具有很強(qiáng)的PCR反應(yīng)抑制物耐受性，能直接以植物材料的裂解產(chǎn)物為模板，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增。該試劑包含公司專門針對直接PCR反應(yīng)改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。與直接裂解液配合使用能夠快速簡便地對樣品進(jìn)行檢測，并具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。
D-Taq DNA polymerase是為直接PCR反應(yīng)專門研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對多種PCR反應(yīng)抑制劑具有極強(qiáng)的的耐受性、在各種復(fù)雜反應(yīng)體系中均能高效擴(kuò)增痕量的DNA，擴(kuò)增速度可達(dá)2Kb/min，特別適合進(jìn)行直接PCR反應(yīng)。
根據(jù)植物樣本差異，該產(chǎn)品分為兩個(gè)大類：植物直接PCR試劑盒(Plant Leaf Direct PCR Kit)和多糖多酚植物直接PCR試劑盒(Plant LeafDirect PCR Plus Kit)；在PCR檢測階段，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選用普通的2× Leaf PCR EasyTM Mix或是具有防PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染作用的2× Leaf PCR EasyTM Mix(UNG)。
試劑盒應(yīng)用
適用范圍：多種植物葉片。
樣本裂解釋放的DNA：僅用作PCR模板。
試劑盒可用于以下用途：轉(zhuǎn)基因植株鑒定、植物基因分型等。
試劑盒局限性
擴(kuò)增片段≤1kb；超過1kb，擴(kuò)增效率下降或者擴(kuò)增失敗。
PCR產(chǎn)物如用于測序建議先進(jìn)行PCR產(chǎn)物純化。
PCR產(chǎn)物可能會(huì)有點(diǎn)突變，如用于基因克隆，請知悉。
PCR產(chǎn)物3’末端隨機(jī)加A尾。
試劑盒內(nèi)容
Buffer PS1：提供植物葉片裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。
Buffer PS2：補(bǔ)充提供多糖多酚植物葉片裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。
Buffer P2：中和裂解產(chǎn)物，使其不影響后續(xù)PCR反應(yīng)。
2× Leaf PCR EasyTM Mix：包含福際生物特別改造的Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應(yīng)時(shí)，只需將適當(dāng)?shù)牧呀饣旌弦?、引物?/span>ddH2O添加到2× Leaf PCR EasyTM Mix中即可用于PCR反應(yīng)。
6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，配搭使用試劑盒附贈(zèng)的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結(jié)果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時(shí)會(huì)在泳道中有一大團(tuán)拖尾亮光，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
儲(chǔ)存條件
全程低溫冰盒運(yùn)輸，保證試劑盒Part I、Part II處于＜4℃狀態(tài)。
本試劑盒Part I保存在2-8℃。
v 試劑Buffer PS1、Buffer P2、6× DNA Loading Buffer在干燥條件下，可保存12個(gè)月；如需保存更長時(shí)間可置于2–8℃。
本試劑盒Part II保存在-20℃。
v 試劑Buffer PS2、2× Leaf PCR EasyTM Mix，在-20℃條件下可保存12個(gè)月；若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內(nèi)用完)。
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
MSDS
COA
正對照、待測樣本均無條帶
Answer
在試劑盒的使用過程中往往會(huì)遇到許多問題，比如：沒有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物、PCR特異性差等，以下就分別對使用植物葉片直接PCR系列可能會(huì)遇到的問題進(jìn)行分析。建議在進(jìn)行直接PCR的同時(shí)設(shè)置陽性對照或陰性對照以便后續(xù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
1. PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。
建議：使用梯度PCR摸索PCR最佳反應(yīng)條件。
2. PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。
建議：2× Leaf PCR EasyTM Mix應(yīng)保存于-20℃，使用時(shí)避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時(shí)間存放。
3. 引物設(shè)計(jì)問題。
建議：嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。
正對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱
Answer
1. 葉片中多糖多酚含量較高，裂解混合液呈棕黃色甚至棕紅色。
建議：使用多糖多酚植物葉片直接PCR試劑盒(Plant Leaf Direct PCR Plus Kit)。
2. 裂解液、中和液加入比例不當(dāng)，裂解混合液影響PCR體系的pH值。
建議：正常條件下，中和后的裂解混合液的pH應(yīng)該在7-8左右(裂解產(chǎn)物和Buffer P2嚴(yán)格按照1:1的量進(jìn)行中和)。
3. 樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時(shí)間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。
建議：裂解液可在4℃保存5天，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。
4. 裂解混合液中抑制物過多。
建議：在PCR反應(yīng)體系5-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。
5. PCR循環(huán)數(shù)不足。
建議：適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟０鍙?fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳。
非特異性擴(kuò)增
Answer
1. 退火溫度偏低。
建議：適當(dāng)提高退火溫度。
2. PCR循環(huán)數(shù)過多。
建議：適當(dāng)降低循環(huán)次數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。
3. 引物濃度偏高。
建議：適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時(shí)，可以在0.1-0.5μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
4. 模板加入量過多。
建議：配制PCR反應(yīng)體系時(shí)，適量減少模板加入量。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)規(guī)范操作，避免在加樣操作中溶液倒吸或飛濺。
2. 樣本間交叉污染。
建議：每個(gè)取樣器只對一個(gè)樣本使用；或取完一個(gè)樣本后，將取樣器刃口或與樣本直接接觸的部位浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復(fù)涮洗數(shù)次進(jìn)行清洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液后再進(jìn)行使用。
3. PCR產(chǎn)物污染。
建議：如果實(shí)驗(yàn)室檢測同類型樣本多，最好使用UNG防PCR產(chǎn)物污染系統(tǒng)的試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
快速的從多糖多酚植物的葉片樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)，并采用UNG防PCR產(chǎn)物污染體系，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。
快速的從植物（如：水稻、小麥、煙草、玉米、大豆、油菜等）的葉片樣本中釋放出基因組 DNA，用于 PCR 反應(yīng)，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。
快速的從植物（如：水稻、小麥、煙草、玉米、大豆、油菜等）的葉片樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)，并采用UNG防PCR產(chǎn)物污染體系，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。
