產(chǎn) 品 名 稱 | 動(dòng)物組織直接PCR試劑盒-防PCR產(chǎn)物污染體系 Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG | ||
貨 號(hào) | TP-01121 | TP-01123 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價(jià) 格 | ￥1,114.00 | ￥7,525.00 | |
| 描 述 | 快速的從動(dòng)物組織樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)，適合快速大規(guī)?；驒z測(cè)；增加了UNG防污染體系，杜絕假陽(yáng)性。 試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品采用獨(dú)特的裂解緩沖液體系可以快速的從動(dòng)物組織樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應(yīng)，因此特別適合大規(guī)?；驒z測(cè)。
裂解緩沖液釋放基因組DNA過(guò)程在65℃條件下10-30 min內(nèi)完成，不需要其他去蛋白、RNA等的過(guò)程，即可將釋放出的微量DNA作為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)。
2× PCR EasyTM Mix具有很強(qiáng)的PCR反應(yīng)抑制物耐受性，能以待測(cè)樣本的裂解液為模板，進(jìn)行高效特異性擴(kuò)增。該試劑包含Foregene D-Taq DNAPolymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。與裂解緩沖液配合使用能夠快速簡(jiǎn)便地對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)，并具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。
2× PCR EasyTM Mix(UNG)在2× PCR EasyTM Mix的基礎(chǔ)上用dUTP替代了dTTP，并同時(shí)加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反應(yīng)前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物，UNG酶對(duì)不含有尿嘧啶的模板不會(huì)造成任何影響，從而保證擴(kuò)增的特異性和準(zhǔn)確性，防止了大規(guī)?；驒z測(cè)時(shí)可能出現(xiàn)的PCR產(chǎn)物污染問(wèn)題。
D-Taq DNA polymerase是Foregene為直接PCR反應(yīng)專門(mén)研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對(duì)多種PCR反應(yīng)抑制劑具有極強(qiáng)的的耐受性、在各種復(fù)雜反應(yīng)體系中均能高效擴(kuò)增痕量的DNA，擴(kuò)增速度可達(dá)2Kb/min，特別適合進(jìn)行直接PCR反應(yīng)。
試劑盒應(yīng)用
適用范圍：多種動(dòng)物組織。
樣本裂解釋放的DNA：僅用作PCR模板。
試劑盒可用于以下用途：轉(zhuǎn)基因型鑒定、動(dòng)物基因分型等。
試劑盒局限性
擴(kuò)增片段≤1kb；超過(guò)1kb，擴(kuò)增效率下降或者擴(kuò)增失敗。
UNG防PCR產(chǎn)物污染體系得到的PCR產(chǎn)物請(qǐng)勿用于基因克隆或測(cè)序。
PCR產(chǎn)物3’末端隨機(jī)加A尾。
試劑盒內(nèi)容
Buffer AL：提供動(dòng)物組織裂解反應(yīng)所需的環(huán)境。
Foregene Protease：在裂解緩沖液的環(huán)境下，裂解動(dòng)物組織，釋放基因組DNA。
2× PCR EasyTM Mix(UNG)：在2× PCR EasyTM Mix的基礎(chǔ)上用dUTP替代了dTTP，并同時(shí)加入能夠降解含有dUTP模板的UNG酶，從而能夠有效防止PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染。包含福際生物特別改造的D-Taq DNA Polymerase、UDG、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應(yīng)時(shí)，只需將適當(dāng)?shù)牧呀饣旌弦骸⒁铩?/span>ddH2O添加到2× PCR EasyTM Mix(UNG)中即可用于PCR反應(yīng)。
6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時(shí)，配搭使用試劑盒附贈(zèng)的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結(jié)果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時(shí)會(huì)在泳道中有一大團(tuán)拖尾亮光，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
儲(chǔ)存條件
全程低溫冰盒運(yùn)輸，保證試劑盒Part I、Part II處于＜4℃狀態(tài)。
本試劑盒Part I保存在2-8℃。
v 試劑Buffer AL，在干燥條件下，可保存12個(gè)月；如需保存更長(zhǎng)時(shí)間可置于2–8℃。
v 試劑Foregene Protease，具有獨(dú)特配方，為保證其活性和穩(wěn)定性，請(qǐng)保存于4℃，保存時(shí)間為12個(gè)月。
v 試劑6× DNA Loading Buffer，可置于4℃或-20℃長(zhǎng)期保存。
本試劑盒Part II保存在-20℃。
v 試劑2× PCR EasyTM Mix(UNG)，在-20℃條件下可保存12個(gè)月；若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內(nèi)用完)。
操作流程
說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品文獻(xiàn)
Development of a direct PCR assay to detect Taenia muticeps eggs isolated from dog feces
Ning Wang, Yu Wang, Qinghua Ye, Yingdong Yang, Jie Wan, Cheng Guo, Jiafei Zhan,Xiaobin Gu, Weimin Lai, Yue Xie, Xuerong Peng, Guangyou Yang
四川農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院寄生蟲(chóng)學(xué)系
Veterinary Parasitology ( IF 2.422 ) Pub Date : 2018-02-15 , DOI：10.1016/j.vetpar.2017.12.017
文章鏈接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401717305290#!
Cerberus-Nodal-Lefty-Pitx signaling cascade controls left-right asymmetry in amphioxus
Xian Liu Guang Li, Huayang Zhang Chaofan Xing, Yiquan Wang Sebastian M. Shimeld
廈門(mén)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院細(xì)胞應(yīng)激生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室
PNAS ( IF 9.661 ) Pub Date : 2017-04-04 , DOI：10.1073/pnas.1620519114
文章鏈接：https://www.pnas.org/content/114/14/3684
PCR-based identification of Trypanosoma lewisi and Trypanosoma musculi using maxicircle kinetoplast DNA
Hong XK, Zhang X, Fusco OA, Lan YG, Lun ZR, Lai DH
中山大學(xué)生命科學(xué)院生物控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室寄生蟲(chóng)中心
Acta Tropica ( IF 2.218 ) Pub Date : 2017-07 , DOI：10.1016/j.actatropica.2017.04.007
文章鏈接：https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0001706X17300402
Outbred genome sequencing and CRISPR/Cas9 gene editing in butterflies
Xueyan Li, Dingding Fan, Wei Zhang, Guichun Liu, Lu Zhang, Li Zhao, Xiaodong Fang, Lei Chen, Yang Dong,w, Yuan Chen, Yun Ding, Ruoping Zhao, Mingji Feng, Yabing Zhu, Yue Feng, Xuanting Jiang, Deying Zhu, Hui Xiang, Xikan Feng, Shuaicheng Li, Jun Wang, Guojie Zhang, Marcus R. Kronforst & Wen Wang
中國(guó)科學(xué)院昆明動(dòng)物研究所遺傳資源與進(jìn)化國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室
Nature Communications ( IF 10.741) Pub Date : 2015-09-10 , DOI：10.1038/ncomms9212
文章鏈接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4568561/
MSDS
COA
正對(duì)照、待測(cè)樣本均無(wú)條帶
Answer
在試劑盒的使用過(guò)程中往往會(huì)遇到許多問(wèn)題，比如：沒(méi)有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物、PCR特異性差等，以下就分別對(duì)使用Animal Tissue Direct PCR Kit系列試劑盒可能會(huì)遇到的問(wèn)題進(jìn)行分析。建議在進(jìn)行直接PCR的同時(shí)設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照或陰性對(duì)照以便后續(xù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
1. PCR反應(yīng)體系或反應(yīng)條件不合適。
建議：使用梯度PCR摸索PCR最佳反應(yīng)條件。
2. PCR試劑保存不當(dāng)失去活性。
建議：2× PCR EasyTM Mix(UNG)應(yīng)保存于-20℃，使用時(shí)避免反復(fù)凍融。若使用頻繁，可在4℃短時(shí)間存放。
3. 引物設(shè)計(jì)問(wèn)題。
建議：嘗試重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。
正對(duì)照有目的條帶，待測(cè)樣本無(wú)條帶或條帶弱
Answer
1. PCR條件沒(méi)有使用正確。
建議：請(qǐng)仔細(xì)確認(rèn)2× PCR Mix的類型，對(duì)應(yīng)相應(yīng)的PCR條件進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
2. 加入組織裂解液過(guò)量。
建議：增大反應(yīng)體系，或減少裂解液的用量。
3. 樣本裂解混合液保存不當(dāng)或保存時(shí)間過(guò)久，DNA基因組已經(jīng)降解。
建議：裂解混合液液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進(jìn)行PCR。
4. 模板加入量不適合。
建議：在反應(yīng)體系10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應(yīng)效性能較差時(shí)，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
5. PCR循環(huán)數(shù)不足。
建議：適當(dāng)增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因?yàn)槟０鍙?fù)雜，一般PCR反應(yīng)要比用純化的DNA模板多5-10個(gè)循環(huán)為佳。
非特異性擴(kuò)增
Answer
1. 退火溫度偏低。
建議：適當(dāng)提高退火溫度?；?qū)ν嘶饻囟茸鲆粋€(gè)梯度摸索。
2. PCR循環(huán)數(shù)過(guò)多。
建議：適當(dāng)降低循環(huán)次數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。
3. 引物濃度偏高。
建議：適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應(yīng)性能較差時(shí)，可以在0.1-0.5μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
4. 模板加入量過(guò)多。
建議：將模板加入量控制在10-20%。反應(yīng)效性能較差時(shí)，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
空白對(duì)照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。
2. 樣本間交叉污染。
建議：每個(gè)取樣器只對(duì)一個(gè)樣本使用；或取完一個(gè)樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復(fù)涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。
3. PCR產(chǎn)物污染。
建議：如果實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)同類型樣本多，最好使用UNG防PCR產(chǎn)物污染系統(tǒng)的試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
