產(chǎn)品名稱 | 鼠尾直接PCR試劑盒(常溫裂解) Mouse Tail SuperDirectTM PCR Kit | ||
貨 號 | TP-01311 | TP-01313 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價 格 | ￥970.00 | ￥6,069.00 | |
| 描 述 | 快速的從鼠尾、小鼠耳朵樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應，適合快速大規(guī)模基因檢測；試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產(chǎn)品介紹
本產(chǎn)品采用獨特的裂解緩沖液體系可以快速的從小鼠鼠尾、鼠耳樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。
裂解緩沖液釋放基因組DNA過程在室溫(20-25°C)條件下10-30 min內(nèi)完成，不需加熱處理，不需要其他去蛋白、RNA等的過程，即可將釋放出的微量DNA作為模板進行PCR反應。
2× M-PCR EasyTM Mix具有很強的PCR反應抑制物耐受性，能以待測樣本的裂解液為模板，進行高效特異性擴增。該試劑包含Foregene D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。與裂解緩沖液配合使用能夠快速簡便地對樣品進行檢測，并具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。
D-Taq DNA polymerase是Foregene為直接PCR反應專門研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對多種PCR反應抑制劑具有極強的的耐受性、在各種復雜反應體系中均能高效擴增痕量的DNA，擴增速度可達2Kb/min，特別適合進行直接PCR反應。
試劑盒應用
適用范圍：小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等組織。
樣本裂解釋放的DNA：僅用作PCR模板。
試劑盒可用于以下用途：轉(zhuǎn)基因型鑒定、動物基因分型等。
試劑盒局限性
擴增片段≤1kb；超過1kb，擴增效率下降或者擴增失敗。
PCR產(chǎn)物如用于測序建議先進行PCR產(chǎn)物純化。
PCR產(chǎn)物可能會有點突變，如用于基因克隆，請知悉。
PCR產(chǎn)物3’末端隨機加A尾。
試劑盒內(nèi)容
Buffer MP：提供小鼠組織裂解反應所需的環(huán)境。
Foregene Protease Plus I：在裂解緩沖液的環(huán)境下，裂解鼠尾或小鼠組織，釋放基因組DNA。
2× M-PCR EasyTM Mix：包含福際生物特別改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應時，只需將適當?shù)牧呀饣旌弦?、引物?/span>ddH2O添加到2× M-PCR EasyTM Mix中即可用于PCR反應。
6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進行瓊脂糖凝膠電泳時，配搭使用試劑盒附贈的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結(jié)果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時會在泳道中有一大團拖尾亮光，影響實驗結(jié)果。
儲存條件
全程低溫冰盒運輸，保證試劑盒Part I、Part II處于＜4℃狀態(tài)。
本試劑盒Part I保存在2-8℃。
v 試劑Buffer NP，在干燥條件下，可保存12個月；如需保存更長時間可置于2–8℃。
v 試劑Foregene Protease Plus I，具有獨特配方，為保證其活性和穩(wěn)定性，請保存于4℃，保存時間為12個月。
v 試劑6× DNA Loading Buffer，可置于4℃或-20℃長期保存。
本試劑盒Part II保存在-20℃。
v 試劑2× M-PCR EasyTM Mix，在-20℃條件下可保存12個月；若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內(nèi)用完)。
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻
Endogenous Omega (n)-3 Fatty Acids in Fat-1 Mice Attenuated Depression-Like Behavior, Imbalance between Microglial M1 and M2 Phenotypes, and Dysfunction of NeurotrophinsInduced by Lipopolysaccharide Administration
Minqing Gu, Yuyu Li, Haiting Tang, Cai Zhang, Wende Li, Yongping Zhang, Yajuan Li, Yuntao Zhao, Cai Song
廣東海洋大學食品科學技術學院海洋藥物與營養(yǎng)研究所
Nutrients ( IF 4.196 ) Pub Date : 2018-09-21 , DOI：10.3390/nu10101351
文章鏈接：https://www.mdpi.com/2072-6643/10/10/1351
MSDS
COA
正對照、待測樣本均無條帶
Answer
在試劑盒的使用過程中往往會遇到許多問題，比如：沒有PCR擴增產(chǎn)物、PCR特異性差等，以下就分別對使用鼠尾直接PCR系列試劑盒可能會遇到的問題進行分析。建議在進行直接PCR的同時設置陽性對照或陰性對照以便后續(xù)分析實驗結(jié)果。
1. PCR反應體系或反應條件不合適。
建議：使用梯度PCR摸索PCR最佳反應條件。
2. PCR試劑保存不當失去活性。
建議：2× M-PCR EasyTM Mix應保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
3. 引物設計問題。
建議：嘗試重新設計引物進行檢查。
正對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱
Answer
1. 加入組織裂解液過量。
建議：增大反應體系，或減少裂解液的用量。
2. 樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經(jīng)降解。
建議：裂解液可在4℃保存2-3天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。
3. 模板加入量不適合。
建議：在反應體系10-20%范圍內(nèi)優(yōu)化模板加入量。反應效性能較差時，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
4. PCR循環(huán)數(shù)不足。
建議：適當增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因為模板復雜，一般PCR反應要比用純化的DNA模板多5-10個循環(huán)為佳。
非特異性擴增
Answer
1. 退火溫度偏低。
建議：適當提高退火溫度?；?qū)ν嘶饻囟茸鲆粋€梯度摸索。
2. PCR循環(huán)數(shù)過多。
建議：適當降低循環(huán)次數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。
3. 引物濃度偏高。
建議：適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結(jié)果。反應性能較差時，可以在0.1-0.5μM范圍內(nèi)調(diào)整引物濃度。
4. 模板加入量過多。
建議：將模板加入量控制在10-20%。反應效性能較差時，可以降模板濃度調(diào)節(jié)到低于10%的范圍。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。操作時應小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或濺出離心管外。
2. 樣本間交叉污染。
建議：每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復涮洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液。
3. PCR產(chǎn)物污染。
建議：如果實驗室檢測同類型樣本多，最好使用UNG防PCR產(chǎn)物污染系統(tǒng)的試劑盒進行實驗。
