產(chǎn) 品 名 稱 | 通用質(zhì)粒小量提取試劑盒 General Plasmid Mini Kit |
貨 號 | DE-01001 |
規(guī) 格 | 50T |
價 格 | ￥181.00 |
描 述 | 快速從轉(zhuǎn)化菌中純化用于轉(zhuǎn)化、酶切等常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的高質(zhì)量質(zhì)粒DNA。 |
產(chǎn)品介紹
本公司的核酸提取和純化系列產(chǎn)品可以從多種來源和復(fù)雜成分樣本中提取純化到高質(zhì)量的核酸。DNA系列產(chǎn)品基于DNA-Only硅膠膜純化柱和獨(dú)特配方試劑可以從多種樣本中純化得到高質(zhì)量DNA。
General Plasmid Mini Kit采用DNA-Only純化柱技術(shù)及高效的SDS裂解配方，可以在20分鐘內(nèi)從細(xì)菌中獲得高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。離心柱中采用的DNA-Only硅膠膜為本公司特有新型材料，高效、專一吸附DNA，可最大限度的去除RNA、雜質(zhì)蛋白、離子及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。DNA-Only純化柱的質(zhì)粒DNA最大結(jié)合能力為60μg DNA，實(shí)際提取獲得的質(zhì)粒DNA量與菌液體積、質(zhì)?？截悢?shù)(高拷貝、低拷貝)、菌株、培養(yǎng)條件等因素相關(guān)。
試劑盒應(yīng)用
該試劑盒適用于革蘭氏陰性菌的質(zhì)粒DNA提取純化。
純化DNA的應(yīng)用
通用質(zhì)粒提取試劑盒純化獲得的質(zhì)粒DNA純度高，可用于常規(guī)分子生物學(xué)操作，如：轉(zhuǎn)化、酶切、PCR、文庫構(gòu)建、轉(zhuǎn)染(傳代細(xì)胞轉(zhuǎn)染)、測序(建議使用ddH2O洗脫質(zhì)粒DNA)。
DNA提取得率和純度
提取的質(zhì)粒DNA量與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、拷貝數(shù)、菌株、培養(yǎng)條件等因素有關(guān)；獲得的質(zhì)粒DNA純度高，OD260/280=1.7-1.9。
質(zhì)粒類型 | 培養(yǎng)條件 | 質(zhì)粒種類 | 得 率 |
低拷貝 | LB、37℃、16hr | pBR322、pACYC及其衍生載體、SuperCos、pWE15、pSC101及其衍生載體 | 1-3μgDNA/ml菌液 |
高拷貝 | LB、37℃、16hr | pcDNA3.1、pBS、pTZ、pGM-T | 5-8μgDNA/ml菌液 |
注：以上數(shù)據(jù)僅供參考，實(shí)際得率和細(xì)菌培養(yǎng)條件，培養(yǎng)時間，操作等有關(guān)。
試劑盒內(nèi)容
Buffer S1：提供細(xì)菌裂解環(huán)境。
Buffer S2：裂解細(xì)菌，變性蛋白和DNA。
Buffer S3：沉淀蛋白和基因組DNA，并提供質(zhì)粒DNA上柱環(huán)境。
Buffer PW：去除質(zhì)粒DNA中的蛋白質(zhì)、RNA等雜質(zhì)。
Buffer WB2：去除質(zhì)粒DNA中的殘留的鹽離子。
Buffer EB：洗脫純化柱膜上的質(zhì)粒DNA。
DNA-Only Column：特異吸附裂解產(chǎn)物中的質(zhì)粒DNA。
產(chǎn)品信息
型號 | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個樣品 | 制備時間 | 20 min (24個樣品) |
離心機(jī) | 臺式離心機(jī) | 細(xì)菌裂解物分離 | 離心分離 |
離心柱液體盛裝量 | 800 μL | 純化柱DNA承載量 | 60 μg |
洗脫體積 | 50-200 μL | 細(xì)菌處理量 | 1-5 mL |
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
MSDS
COA
低產(chǎn)量或無DNA
Answer
通常有多種因素會影響質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量，包括菌種、質(zhì)粒、培養(yǎng)條件、操作等等。
1. 培養(yǎng)的細(xì)菌沒有轉(zhuǎn)化相應(yīng)的質(zhì)粒DNA或細(xì)菌培養(yǎng)條件不正確。
建議：挑選確定含有轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA的細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)，并確認(rèn)細(xì)菌培養(yǎng)條件。
2. 細(xì)菌保存時間過長。細(xì)菌在甘油凍存液中保存時間較長，常會出現(xiàn)質(zhì)粒丟失的現(xiàn)象。
建議：可以重新劃平板，挑取含質(zhì)粒的單菌落或重新轉(zhuǎn)化細(xì)菌。
3. 細(xì)菌制備時間過長。
建議：使用新制備的細(xì)菌提取質(zhì)粒DNA。
4. Buffer S2出現(xiàn)沉淀。
建議：將Buffer S2置于37℃溶解，混勻后再使用。
5. Buffer WB2沒有添加無水乙醇。
建議：確認(rèn)Buffer WB2中添加正確體積的無水乙醇。
6. 細(xì)菌重懸不徹底或者沒有進(jìn)行細(xì)菌重懸。
建議：離心收集的菌體在加入Buffer S1后徹底重懸，可以使用移液器反復(fù)吹打或渦旋儀徹底打散菌體。采用2mL離心管也有助于細(xì)菌重懸。
7. 洗脫液沒有正確滴加到硅膠膜上。
建議：將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置2分鐘增加洗脫效率。
提取獲得低產(chǎn)量質(zhì)粒DNA
Answer
1. 菌株本身原因。
建議：使用實(shí)驗(yàn)室常用大腸桿菌菌株并確認(rèn)其培養(yǎng)條件。
2. 低拷貝質(zhì)粒。
建議：適量增加菌液制備量可一定程度上提高低拷貝質(zhì)粒DNA的提取量。
3. 細(xì)菌重懸不徹底。
建議：離心收集的菌體在加入Buffer S1后徹底重懸，可以使用移液器反復(fù)吹打或渦旋儀徹底打散菌體。采用2mL離心管也有助于細(xì)菌重懸。
4. Buffer S2、Buffer S3析出少量沉淀。
建議：將Buffer S2、Buffer S3置于37℃溶解，混勻后再使用。
5. 細(xì)菌保存時間過長。
建議：使用新制備的細(xì)菌提取質(zhì)粒DNA。
6. 洗脫液問題
建議：請使用Buffer EB進(jìn)行洗脫；如果使用ddH2O或其他洗脫液，確認(rèn)洗脫液的pH值在7-8.5之間。
7. 洗脫液沒有正確滴加
建議：請將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置2分鐘增加洗脫效率。
8. 洗脫液體積太少
建議：請按說明書上要求使用洗脫液進(jìn)行質(zhì)粒DNA洗脫，最少不要低于50μL。
提取獲得質(zhì)粒DNA純度低
Answer
1. 質(zhì)粒DNA污染
a. 分析：細(xì)菌培養(yǎng)時間過長或細(xì)菌生長過度，部分細(xì)菌裂解釋放基因組DNA，并降解。
建議：細(xì)菌培養(yǎng)時間控制在16-20hr。
b. 分析：加入BufferS2后劇烈震蕩。
建議：加入Buffer S2后輕柔混勻。不可劇烈震蕩或使用渦旋儀。
c. 分析：裂解時間過長
建議：Buffer S2加入后立即混勻，裂解時間不要超過5分鐘。
2. 雜蛋白污染、內(nèi)毒素污染、RNA污染
分析：在加入Buffer S3離心后，過柱上清液中含有細(xì)小的沉淀；沒有使用Buffer PW洗滌純化柱；Buffer PW洗滌純化柱沒有使用正確的離心轉(zhuǎn)速。
建議：盡量使用實(shí)驗(yàn)室常見菌株，如DH5α、JM109、Top10等；在上清液過柱時盡量保證上清液中無沉淀；務(wù)必按說明書規(guī)定的離心轉(zhuǎn)速(900 ×g)進(jìn)行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
3. 雜質(zhì)離子污染
分析：省略了Buffer WB2洗滌純化柱或者只洗滌了一次，導(dǎo)致殘留的離子污染。
建議：務(wù)必按說明書使用Buffer WB2洗滌2次，以盡量去除殘留的離子。
4. RNA酶污染
分析：Buffer S1中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗滌操作不正確，導(dǎo)致RNA酶殘留，影響下游RNA實(shí)驗(yàn)操作，如：體外轉(zhuǎn)錄等。
建議：Foregene系列質(zhì)粒提取試劑盒無需額外添加RNA酶即可去除RNA， Plasmid Mini Kit里面所有試劑均無需添加RNA酶；務(wù)必按說明書規(guī)定的離心轉(zhuǎn)速(900 ×g)進(jìn)行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
5. 乙醇?xì)埩?/span>
分析：Buffer WB2洗滌純化柱后，沒有進(jìn)行空管離心操作。
建議：按說明書進(jìn)行正確的空管離心操作。
6. 其他質(zhì)粒DNA污染
分析：在瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)目的質(zhì)粒DNA外的其他質(zhì)粒條帶，可能是轉(zhuǎn)化質(zhì)粒菌株被其他雜菌污染。
建議：盡量挑取單克隆細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)；細(xì)菌接種時在無菌環(huán)境中進(jìn)行。
