無(wú)RNA酶污染：試劑盒提供的DNA-Only Column使得實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)需額外添加RNA酶即可去除基因組DNA中的RNA，避免實(shí)驗(yàn)室遭受外源RNA酶污染。
速度快：Foregene Protease具有比同類蛋白酶更高的活性，消化組織樣本速度快；操作簡(jiǎn)單，基因組DNA提取操作在50分鐘內(nèi)即可完成。
方 便：離心操作均在常溫，無(wú)需4℃低溫離心或乙醇沉淀DNA。
安 全：無(wú)需有機(jī)試劑抽提。
質(zhì)量高：提取獲得的基因組DNA片段大、無(wú)RNA、無(wú)RNA酶、離子含量極低，能滿足各種實(shí)驗(yàn)的要求。
產(chǎn) 品 名 稱 | 動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒 Animal Tissue DNA Isolation Kit |
貨 號(hào) | DE-05011 |
規(guī) 格 | 50T |
價(jià) 格 | ￥397.00 |
描 述 | 快速提取純化多種來(lái)源的基因組DNA，如：動(dòng)物組織、細(xì)胞等。 |
產(chǎn)品介紹
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的DNA-Only Column、全新的Foregene Protease以及獨(dú)特的緩沖液體系，可以在30-50分鐘內(nèi)從各種培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織中提取到高質(zhì)量的基因組DNA。
離心柱中采用的DNA-Only硅膠膜為本公司特有新型材料，高效、專一吸附DNA，可最大限度的去除RNA、雜質(zhì)蛋白、離子及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。組織塊只需10-50mg即可得到5-80μg基因組DNA。
試劑盒應(yīng)用
該試劑盒適用于多種新鮮或凍存的培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織基因組DNA提取純化。
純化DNA的應(yīng)用
動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒純化獲得的基因組DNA純度高，可用于常規(guī)分子生物學(xué)操作，如：酶切、PCR、Southern雜交、文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。
DNA提取得率和純度
動(dòng)物組織基因組DNA提取得率與組織的來(lái)源、保存條件、保存時(shí)間、用量等因素相關(guān)，所得基因組DNA純度均滿足常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作，其OD260/280在1.7-1.9之間。使用該試劑盒提取基因組DNA的得率見(jiàn)下表：
樣本來(lái)源 | 樣本用量 | DNA產(chǎn)量 (μg) | OD260/280 |
細(xì)胞 | 106 | 15-30 | 1.7-1.9 |
肝臟 | 10mg | 4-10 | 1.7-1.9 |
心臟 | 10mg | 2-5 | 1.7-1.9 |
脾臟 | 10mg | 5-30 | 1.7-1.9 |
大腦 | 10mg | 5-10 | 1.7-1.9 |
注意：此表數(shù)據(jù)僅作參考，實(shí)際操作中由于所用材料的存儲(chǔ)條件、操作熟練度等因素影響，所得數(shù)據(jù)會(huì)與此表數(shù)據(jù)有些許出入。
試劑盒內(nèi)容
Buffer L1：提供動(dòng)物組織樣本酶解環(huán)境。
Foregene Protease：在Buffer L1的環(huán)境下酶解組織樣本。
Buffer L2：失活Foregene Protease，并提供DNA上柱環(huán)境。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白質(zhì)、RNA等雜質(zhì)。
Buffer WB：去除DNA中的殘留的鹽離子。
Buffer EB：洗脫純化柱膜上的DNA。
DNA-only Column：特異吸附裂解產(chǎn)物中的基因組DNA。
產(chǎn)品信息
型號(hào) | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個(gè)樣品 | 制備時(shí)間 | 30-50 min (24個(gè)樣品) |
離心機(jī) | 臺(tái)式離心機(jī) | 組織酶解物分離 | 離心分離 |
離心柱液體盛裝量 | 800 μL | 純化柱DNA承載量 | 80 μg |
洗脫體積 | 100-200 μL | 組織樣本處理量 | 10-50 mg |
操作流程
說(shuō)明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
A long noncoding RNA distributed in both nucleus and cytoplasm operates in the PYCARD-regulated apoptosis by coordinating the epigenetic and translational regulation
Hui Miao, Linlin Wang, Haomiao Zhan, Jiangshan Dai, Yanbo Chang, Fan Wu, Tao Liu, Zhongyu Liu, Chunfang Gao, Ling Li, Xu Song
四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院功能基因組學(xué)與生物信息學(xué)中心
教育部生物資源與生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室
Plos Genetics ( IF 5.54 ) Pub Date : 2019-05-14 , DOI: 10.1371/journal.pgen.1008144
文章鏈接：https://journals.plos.org/plosgenetics/article?id=10.1371%2Fjournal.pgen.1008144#sec011
MSDS
COA
提取過(guò)程中無(wú)法獲得基因組DNA
Answer
通常有多種因素會(huì)影響基因組DNA產(chǎn)量，包括樣本來(lái)源、樣本保存條件、樣本的預(yù)處理、操作等。
1. 組織樣本保存不當(dāng)或保存時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致基因組DNA已經(jīng)降解。
建議：組織樣本保存于液氮或者-80℃；盡量使用新近采集組織樣本進(jìn)行基因組DNA的提取。
2. 組織用量過(guò)少可能導(dǎo)致提取不到相應(yīng)的基因組DNA。
建議：對(duì)于保存時(shí)間很長(zhǎng)或基因組DNA降解比較厲害的組織樣本，可以適當(dāng)增加組織樣本的用量，以便提取獲得可觀的基因組DNA。可以根據(jù)DNA需要確定樣本的用量，但是不宜超過(guò)50mg。
3. Foregene Protease保存不當(dāng)，導(dǎo)致其活性降低或失活。
建議：確認(rèn)Foregene Protease保存條件或者更換新的Foregene Protease進(jìn)行酶解反應(yīng)。
4. 試劑盒保存不當(dāng)或存放時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致試劑盒里面某些組分失效。
建議：購(gòu)置新的動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行相關(guān)操作。
5. 試劑盒使用不當(dāng)，比如有些組織需要專用的試劑盒進(jìn)行處理。
建議：購(gòu)置樣本專用的試劑盒，比如土壤基因組DNA的提取，需要購(gòu)買專用的Soil DNA Isolation Kit。
6. Buffer WB沒(méi)有添加無(wú)水乙醇。
建議：確認(rèn)Buffer WB中添加正確體積的無(wú)水乙醇。
7. 洗脫液沒(méi)有正確滴加到硅膠膜上。
建議：將65℃預(yù)熱的洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
提取獲得低產(chǎn)量基因組DNA
Answer
1. 樣本保存不當(dāng)或保存時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致基因組DNA降解。
建議：組織樣本保存于液氮或者-80°C；盡量使用新近采集組織樣本進(jìn)行基因組DNA的提取。
2. 組織樣本用量過(guò)少，提取到的基因組DNA含量會(huì)較少。
建議：對(duì)于保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或基因組DNA降解比較厲害的組織樣本，可以適當(dāng)增加組織樣本的用量，以便提取獲得可觀的基因組DNA?？梢愿鶕?jù)DNA需要確定樣本的用量，但是不宜超過(guò)50mg。
3. 樣本用量過(guò)多，導(dǎo)致消化不完全，離心不徹底，上柱離心時(shí)可能堵塞純化柱，提取獲得的基因組DNA會(huì)較少。
建議：根據(jù)組織的不同，用量在10-50mg內(nèi)調(diào)整，當(dāng)出現(xiàn)消化不完全或純化柱堵塞時(shí)，請(qǐng)減少相應(yīng)的組織用量。
4. 樣本沒(méi)有進(jìn)行預(yù)處理或預(yù)處理的不徹底。
建議：特殊保存的樣本或者一些比較特殊的樣本一定要進(jìn)行酶解前預(yù)處理，這樣可以去除樣本保存液或影響蛋白酶活性的因子，使酶解反應(yīng)進(jìn)行的更徹底，提取獲得更高得率的基因組DNA。
5. 特殊的保存的組織樣本，比如石蠟包埋、鼠尾等。
建議：購(gòu)買專用的基因組DNA提取試劑盒，如石蠟包埋樣本，可選購(gòu)FFPE DNA IsolationKit；鼠尾樣本，可選購(gòu)Mouse Tail DNA Mini Kit。這些組織用其專門的試劑盒處理，DNA提取得率會(huì)更高，效果更理想。
6. Foregene Protease保存不當(dāng)，導(dǎo)致其活性降低或失活。
建議：確認(rèn)Foregene Protease保存條件或者更換新的Foregene Protease進(jìn)行酶解反應(yīng)。
7. 洗脫液?jiǎn)栴}。
建議：請(qǐng)使用Buffer EB進(jìn)行洗脫；如果使用ddH2O或其他洗脫液，確認(rèn)洗脫液的pH值在7.0-8.5之間。
8. 洗脫液沒(méi)有正確滴加。
建議：請(qǐng)將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
9. 洗脫液體積太少。
建議：請(qǐng)按說(shuō)明書上要求使用洗脫液進(jìn)行基因組DNA洗脫，最少不要低于100μL。
提取獲得基因組DNA純度低
Answer
基因組DNA純度低會(huì)導(dǎo)致下游實(shí)驗(yàn)的失敗或效果不理想，如：酶切不開(kāi)，PCR得不到目的基因片段等。
1. 雜蛋白污染、RNA污染。
分析：沒(méi)有使用Buffer PW洗滌純化柱；Buffer PW洗滌純化柱沒(méi)有使用正確的離心轉(zhuǎn)速。
建議：在上清液過(guò)柱時(shí)盡量保證上清液中無(wú)沉淀；務(wù)必按說(shuō)明書進(jìn)行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
2. 雜質(zhì)離子污染。
分析：省略了Buffer WB洗滌純化柱或者只洗滌了一次，導(dǎo)致殘留的離子污染。
建議：務(wù)必按說(shuō)明書使用Buffer WB洗滌2次，以盡量去除殘留的離子。
3. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗滌操作不正確，導(dǎo)致RNA酶殘留，影響下游RNA實(shí)驗(yàn)操作，如：體外轉(zhuǎn)錄等。
建議：Foregene系列核酸提取試劑盒無(wú)需額外添加RNA酶即可去除RNA，Animal Tissue DNA Isolation Kit里面所有試劑均無(wú)需添加RNA酶；務(wù)必按說(shuō)明書進(jìn)行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
4. 乙醇?xì)埩簟?/span>
分析：Buffer WB洗滌純化柱后，沒(méi)有進(jìn)行空管離心操作。
建議：按說(shuō)明書進(jìn)行正確的空管離心操作。
5. 其他雜質(zhì)污染。
分析：保存樣本或特殊樣本沒(méi)有進(jìn)行預(yù)處理。
建議：按操作說(shuō)明對(duì)樣本進(jìn)行徹底的預(yù)處理。
