無(wú)RNA酶污染：試劑盒提供的DNA-Only Column使得實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)需額外添加RNA酶即可去除基因組DNA中的RNA，避免實(shí)驗(yàn)室遭受外源RNA酶污染。
速度快：操作簡(jiǎn)單，糞便基因組DNA提取操作在40分鐘內(nèi)即可完成。
方 便：離心操作均在常溫，無(wú)需4℃低溫離心或乙醇沉淀DNA。
安 全：無(wú)需有機(jī)試劑抽提。
質(zhì)量高：提取獲得的基因組DNA片段大、無(wú)RNA、無(wú)RNA酶、離子含量極低，能滿(mǎn)足各種實(shí)驗(yàn)的要求。
| 產(chǎn) 品 名 稱(chēng) | 糞便基因組DNA提取試劑盒 Stool DNA Isolation Kit |
| 貨 號(hào) | DE-05713 |
| 規(guī) 格 | 50T |
| 價(jià) 格 | ￥762.00 |
| 描 述 | 快速?gòu)母鞣N糞便樣本中純化獲得高質(zhì)量的基因組DNA。 |
產(chǎn)品介紹
本試劑盒提供了從各種來(lái)源的糞便樣本中快速簡(jiǎn)便的提取細(xì)菌、食物殘?jiān)然蚪MDNA的方法。糞便樣品中存在大量的抑制因子，這些物質(zhì)即使微量存在于純化后的DNA中也會(huì)對(duì)下游反應(yīng)，如對(duì)PCR、限制性酶切等產(chǎn)生影響。因而純化糞便DNA的關(guān)鍵在于如何有效的去除糞便中的抑制因子。
本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的DNA-Only Column、全新的Foregene Protease以及獨(dú)特的緩沖液體系，可以有效的去除糞便中各種抑制因子，無(wú)需有機(jī)溶劑抽提或乙醇及異丙醇沉淀，在40分鐘內(nèi)即可完成對(duì)糞便樣品中DNA的提取操作。
試劑盒應(yīng)用
該試劑盒適用于純化以下樣本基因組DNA：新鮮或凍存的人、牛、雞、小鼠等糞便樣本。
純化DNA的應(yīng)用
糞便基因組DNA提取試劑盒純化獲得的基因組DNA純度高，可用于常規(guī)分子生物學(xué)操作，如：酶切、PCR、Southern雜交、文庫(kù)構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)。
DNA提取得率和純度
提取獲得的糞便基因組DNA量與糞便樣本的來(lái)源、存放時(shí)間、水分含量等因素相關(guān)。使用Stool DNA Isolation Kit處理各種來(lái)源糞便樣本，獲得的基因組DNA量和純度見(jiàn)下表：
糞便來(lái)源 | 樣本用量(mg) | DNA產(chǎn)量(μg) | OD260/280 | OD260/230 |
黃牛 | 200 | 4-6 | 1.7-1.9 | 1.7-1.9 |
家豬 | 200 | 4-6 | 1.7-1.9 | 1.8-1.9 |
家禽(雞) | 200 | 4-6 | 1.7-1.9 | 1.7-1.8 |
注意：此表數(shù)據(jù)僅作參考，實(shí)際操作中由于所用材料的存儲(chǔ)條件、操作熟練度等因素影響，所得數(shù)據(jù)會(huì)與此表數(shù)據(jù)有些許出入。
試劑盒內(nèi)容
Lysozyme：酶解陽(yáng)性菌細(xì)胞壁。
Buffer TE：用于配制100mg/ml Lysozyme的溶液和提供溶菌酶酶解環(huán)境。
Buffer SL1：提供樣本蛋白酶酶解環(huán)境。
Foregene Protease：在蛋白酶酶解環(huán)境下酶解樣本，釋放基因組DNA。
Buffer SL2：去油脂類(lèi)雜質(zhì)。
Buffer SL3：失活蛋白酶并提供DNA上柱環(huán)境。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白質(zhì)、RNA等雜質(zhì)。
Buffer WB：去除DNA中的殘留的鹽離子。
Buffer EB：洗脫純化柱膜上的DNA。
DNA-only Column：特異吸附裂解產(chǎn)物中的基因組DNA。
產(chǎn)品信息
型號(hào) | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個(gè)樣品 | 制備時(shí)間 | ~40 min (24個(gè)樣品) |
離心機(jī) | 臺(tái)式離心機(jī) | 組織酶解物分離 | 離心分離 |
離心柱液體盛裝量 | 800 μL | 純化柱DNA承載量 | 80 μg |
洗脫體積 | 50-200 μL | 糞便樣本處理量 | 50-200 mg |
操作流程
說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品文獻(xiàn)
Polysaccharide extracted from Enteromorpha ameliorates Cisplastin-induced small intestine injury in mice
Ren Xinxiu, Liu Lei, Liu Pingkun, Gamallat Yaser, Xin Yi, Shang Dong ?
大連醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)系
Journal of Functional Foods( IF 3.47 ) Pub Date : 2018-10, DOI：10.1016/j.jff.2018.08.023
文章鏈接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S175646461830447X
MSDS
COA
提取過(guò)程中無(wú)法獲得基因組DNA
Answer
通常有多種因素會(huì)影響基因組DNA產(chǎn)量，包括樣本來(lái)源、樣本保存條件、樣本的預(yù)處理、操作等。
1. 糞便樣本保存不當(dāng)或保存時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致糞便里面的菌落死亡，基因組DNA已經(jīng)降解。
建議：糞便樣本保存于-20℃或者-80℃，并盡量避免反復(fù)凍融；盡量采用新近采取的糞便樣本進(jìn)行基因組DNA的提取。
2. 糞便用量過(guò)少。如果樣本用量很少，可能導(dǎo)致提取不到相應(yīng)的基因組DNA。
建議：對(duì)于菌落含量較少的糞便樣本，盡量使用200mg樣本進(jìn)行基因組DNA提取操作。
3. 試劑盒保存不當(dāng)或存放時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致試劑盒里面某些組分失效。
建議：購(gòu)置新的糞便基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行相關(guān)操作。
4. Buffer WB沒(méi)有添加無(wú)水乙醇。
建議：確認(rèn)Buffer WB中添加正確體積的無(wú)水乙醇。
5. 洗脫液沒(méi)有正確滴加到硅膠膜上。
建議：將65℃預(yù)熱的洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
6. 沒(méi)有使用專(zhuān)用的試劑盒進(jìn)行糞便基因組DNA的提取。
建議：使用糞便專(zhuān)用的Stool DNA Isolation Kit進(jìn)行糞便基因組DNA的提取。
提取獲得低產(chǎn)量基因組DNA
Answer
1. 糞便樣本保存不當(dāng)或保存時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致糞便里面大量的菌落死亡，基因組DNA降解。
建議：糞便樣本保存于-20℃或者-80℃，并避免反復(fù)凍融；盡量采用新近采取的糞便樣本進(jìn)行基因組DNA的提取。
2. 糞便用量過(guò)少，提取到的基因組DNA含量會(huì)較少。
建議：盡量使用50-200mg樣本進(jìn)行基因組DNA提取操作，如樣本量確實(shí)較少，可適當(dāng)?shù)倪M(jìn)行增菌培養(yǎng)后再進(jìn)行提取。
3. 洗脫液?jiǎn)栴}。
建議：請(qǐng)使用Buffer EB進(jìn)行洗脫；如果使用ddH2O或其他洗脫液，確認(rèn)洗脫液的pH值在7.0-8.5之間。
4. Foregene Protease保存不當(dāng)，導(dǎo)致其活性降低或失活。
建議：確認(rèn)Foregene Protease保存條件或者更換新的Foregene Protease進(jìn)行酶解反應(yīng)。
5. 洗脫液沒(méi)有正確滴加。
建議：將65℃預(yù)熱的洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
6. 洗脫液體積太少。
建議：請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)上要求使用洗脫液進(jìn)行基因組DNA洗脫，最少不要低于60μL。
提取獲得基因組DNA純度低
Answer
基因組DNA純度低會(huì)導(dǎo)致下游實(shí)驗(yàn)的失敗或效果不理想，如：酶切不開(kāi)，PCR得不到目的基因片段等。
1. 樣品裂解不充分。
分析：加入Buffer SL1后，沒(méi)有充分混勻，使得裂解液和樣品不能較好的反應(yīng)。
建議：務(wù)必按照說(shuō)明書(shū)要求上下顛倒劇烈混勻5sec，使得裂解液可以和樣品充分接觸，完成裂解。
2. 雜質(zhì)吸附不完全。
分析：在加入Buffer SL2前沒(méi)有將Buffer SL2充分混勻后，或是在加入后沒(méi)有充分混勻或加入Buffer SL2量較少，使得吸附劑不能完全吸附樣品中的雜質(zhì)。
建議：務(wù)必按照說(shuō)明書(shū)要求在使用前Buffer SL2充分混勻，保證溶液沒(méi)有分層和結(jié)塊，并加入正確體積的Buffer SL2并上下顛倒充分混勻，使得吸附劑可以和樣品充分接觸，起到徹底吸附雜質(zhì)的作用。
3. 雜蛋白污染、RNA污染。
分析：沒(méi)有使用Buffer PW洗滌純化柱；Buffer PW洗滌純化柱沒(méi)有使用正確的離心轉(zhuǎn)速。
建議：在上清液過(guò)柱時(shí)盡量保證上清液中無(wú)沉淀；務(wù)必按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
4. 雜質(zhì)離子污染。
分析：省略了Buffer WB洗滌純化柱或者只洗滌了一次，導(dǎo)致殘留的離子污染。
建議：務(wù)必按說(shuō)明書(shū)使用Buffer WB洗滌2次，以盡量去除殘留的離子。
5. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗滌操作不正確，導(dǎo)致RNA酶殘留，影響下游RNA實(shí)驗(yàn)操作，如：體外轉(zhuǎn)錄等。
建議：Foregene系列核酸提取試劑盒無(wú)需額外添加RNA酶即可去除RNA， Soil DNA Isolation Kit里面所有試劑均無(wú)需添加RNA酶；務(wù)必按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
6. 乙醇?xì)埩簟?/span>
分析：Buffer WB洗滌純化柱后，沒(méi)有進(jìn)行空管離心操作。
建議：按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行正確的空管離心操作。
