| 產(chǎn) 品 名 稱 | 水體基因組DNA提取試劑盒 Water DNA Isolation Kit |
| 貨 號 | DE-05613 |
| 規(guī) 格 | 50T |
| 價 格 | ￥617.00 |
| 描 述 | 快速從各種水源樣本微生物中純化高質(zhì)量的基因組DNA。 |
產(chǎn)品介紹
本試劑盒提供了從各種來源的水體樣本中快速簡便的提取基因組DNA的方法。水體樣品中存在大量微生物，這些微生物被作為重要的生態(tài)指示劑被廣泛應用。從水體中提取高純度的基因組DNA是水體環(huán)境值檢測非常重要的手段。
水體樣品中含有大量的抑制因子如腐殖酸、金屬離子等，這些物質(zhì)即使微量存在于純化后的DNA中也會對下游反應產(chǎn)生影響，如對PCR、限制性酶切等。因而純化水體基因組DNA的關(guān)鍵在于如何有效的去除水體中的抑制因子。采用本公司特有的DNA-only硅膠膜離心柱和溶液配方，搭配Foregene Protease，可以有效的去除水體中各種抑制因子，無需有機溶劑抽提或乙醇及異丙醇沉淀，在40分鐘內(nèi)即可完成對水體樣品中DNA的提取操作。
試劑盒應用
該試劑盒適用于純化以下樣本基因組DNA：養(yǎng)殖塘水、池塘水、自來水、湖水、河水、荷塘水等樣本。
純化DNA的應用
水體基因組DNA提取試劑盒純化獲得的基因組DNA純度高，可用于常規(guī)分子生物學操作，如：酶切、PCR、Southern雜交、文庫構(gòu)建等實驗。
DNA提取得率和純度
提取獲得的水體基因組DNA量與水體樣本的來源、濁度、微生物含量等因素相關(guān)。根據(jù)WaterDNA Isolation Kit處理各種來源水體樣本，獲得的基因組DNA量和純度見下表：
水體來源 | 樣本用量(mL) | DNA產(chǎn)量(μg) | OD260/280 | OD260/230 |
河水 | 400 | 1-2 | 1.7-1.9 | 1.7-1.9 |
池塘水 | 400 | 5-7 | 1.7-1.9 | 1.7-1.9 |
養(yǎng)殖塘水 | 20 | 1-2 | 1.7-1.9 | 1.8-1.9 |
自來水 | 4000 | 0.05-0.1 | ≈1.8 | 1.9-2.0 |
注意：此表數(shù)據(jù)僅作參考，實際操作中由于所用材料的存儲條件、操作熟練度等因素影響，所得數(shù)據(jù)會與此表數(shù)據(jù)有些許出入。
試劑盒內(nèi)容
Lysozyme：酶解陽性菌細胞壁。
Buffer TE：用于配制100mg/ml Lysozyme的溶液和提供溶菌酶酶解環(huán)境。
Buffer SG1 & Buffer SG2：提供樣本蛋白酶酶解環(huán)境。
Foregene Protease：在蛋白酶酶解環(huán)境下酶解樣本，釋放基因組DNA。
Buffer SG3：失活Foregene Protease，并提供DNA上柱環(huán)境。
Buffer SG4：補充提供DNA上柱環(huán)境。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白質(zhì)、RNA等雜質(zhì)。
Buffer WB：去除DNA中的殘留的鹽離子。
Buffer EB：洗脫純化柱膜上的DNA。
DNA-only Column：特異吸附裂解產(chǎn)物中的基因組DNA。
產(chǎn)品信息
型號 | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個樣品 | 制備時間 | ~40 min (24個樣品) |
離心機 | 臺式離心機 | 組織酶解物分離 | 離心分離 |
離心柱液體盛裝量 | 800 μL | 純化柱DNA承載量 | 80 μg |
洗脫體積 | 50-200 μL | 水體處理量 | 10mL-30L |
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻
MSDS
COA
提取過程中無法獲得基因組DNA
Answer
通常有多種因素會影響基因組DNA產(chǎn)量，包括樣本來源、樣本保存條件、樣本的預處理、操作等。
1. 水體樣品泥沙含量較大，但微生物含量較少，導致過濾過程中濾膜過早堵塞，膜上微生物較少，無法獲取基因組DNA。
建議：如果樣品中含有大量泥沙，建議將樣品靜置一段時間后，取上層液體進行過濾。
2. 水體樣品過濾體積過小或者是水體中微生物含量較少，可能導致提取不到相應的基因組DNA。
建議：對于微生物含量較少的水體樣本品，應盡量增加過濾體積，如自來水應使用2L以上進行過濾，進行基因組DNA提取操作。
3. 試劑盒保存不當或存放時間太長，導致試劑盒里面某些組分失效。
建議：購置新的水體基因組DNA提取試劑盒進行相關(guān)操作。
4. Buffer WB沒有添加無水乙醇。
建議：確認Buffer WB中添加正確體積的無水乙醇。
5. 洗脫液沒有正確滴加到硅膠膜上。
建議：將65℃預熱的洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
提取獲得低產(chǎn)量基因組DNA
Answer
1. 水體樣品泥沙含量較大，但微生物含量較少，導致過濾過程中濾膜過早堵塞，膜上微生物較少，無法獲取基因組DNA。
建議：如果樣品中含有大量泥沙，建議將樣品靜置一段時間后，取上層液體進行過濾。
2. 水體樣品過濾體積過小或者是水體中微生物含量較少，可能導致提取不到相應的基因組DNA。
建議：對于微生物含量較少的水體樣本品，應盡量增加過濾體積，如自來水應使用2L以上進行過濾，進行基因組DNA提取操作。
3. 洗脫液問題。
建議：請使用Buffer EB進行洗脫；如果使用ddH2O或其他洗脫液，確認洗脫液的pH值在7-8.5之間。
4. 洗脫液沒有正確滴加。
建議：請將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
5. 洗脫液體積太少。
建議：請按說明書上要求使用洗脫液進行基因組DNA洗脫，最少不要低于50μL。
提取獲得基因組DNA純度低
Answer
基因組DNA純度低會導致下游實驗的失敗或效果不理想，如：酶切不開，PCR得不到目的基因片段等。
1. 濾膜沒有剪碎，造成裂解不完全。
建議：在裂解之前，應嚴格按照說明書，將濾膜盡量剪碎。一般情況下，建議只剪取1/2濾膜進行基因組DNA提取，在微生物含量非常少的情況下可使用整張濾膜進行基因組DNA提取。
2. 雜蛋白污染、RNA污染。
分析：沒有使用Buffer PW洗滌純化柱；Buffer PW洗滌純化柱沒有使用正確的離心轉(zhuǎn)速。
建議：在上清液過柱時盡量保證上清液中無沉淀；務必按說明書進行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
3. 雜質(zhì)離子污染。
分析：省略了Buffer WB洗滌純化柱或者只洗滌了一次，導致殘留的離子污染。
建議：務必按說明書使用Buffer WB洗滌2次，以盡量去除殘留的離子。
4. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗滌操作不正確，導致RNA酶殘留，影響下游RNA實驗操作，如：體外轉(zhuǎn)錄等。
建議：Foregene系列核酸提取試劑盒無需額外添加RNA酶即可去除RNA，Water DNA Isolation Kit里面所有試劑均無需添加RNA酶；務必按說明書進行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
5. 乙醇殘留。
分析：Buffer WB洗滌純化柱后，沒有進行空管離心操作。
建議：按說明書進行正確的空管離心操作。
