| 產(chǎn) 品 名 稱 | 細菌基因組DNA提取試劑盒 Bacterial DNA Isolation Kit |
| 貨 號 | DE-05311 |
| 規(guī) 格 | 50T |
| 價 格 | ￥397.00 |
| 描 述 | 快速從對數(shù)生長期的細菌中純化獲得高質量的基因組DNA。 |
產(chǎn)品介紹
本試劑盒提供了從各種來源的細菌(革蘭氏陰性和革蘭氏陽性)培養(yǎng)液中快速簡便的提取基因組DNA的方法；一次可處理小于3mL處于對數(shù)生長期的細菌培養(yǎng)液(1×109細菌)。試劑盒搭配高效的Foregene Protease，使得可以在1小時內提取到15-50μg高質量的基因組DNA。此外，該試劑盒還可以抽提得到除基因組以外的遺傳物質，如質粒，Cosmid，BAC等。
離心柱中采用的DNA-only硅膠基質材料為本公司特有的新型材料，能高效、特異的吸附DNA，對DNA的最大吸附量為80μg，獨特的緩沖、洗脫體系可最大限度的去除RNA、雜質蛋白、離子及細胞中其他有機化合物。提取得到的基因組DNA片段大、純度高、質量穩(wěn)定可靠，DNA片段大小穩(wěn)定在23kb左右。
試劑盒應用
該試劑盒適用于純化以下樣本基因組DNA：處于對數(shù)生長期的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌。
純化DNA的應用
細菌基因組DNA提取試劑盒純化獲得的基因組DNA純度高，可用于常規(guī)分子生物學操作，如：酶切、PCR、Southern雜交、文庫構建等實驗。
DNA提取得率和純度
使用細菌基因組DNA提取試劑盒處理細菌獲得的基因組DNA量與樣本的來源、保存時間、培養(yǎng)時間等因素相關。一般正常情況下獲得的細菌基因組DNA為細菌細胞中DNA總和，3mL過夜培養(yǎng)的細菌其基因組DNA產(chǎn)量約在15-50μg。實際操作中，獲得的量可能會與該數(shù)據(jù)有些許出入。
試劑盒內容
Buffer ML1：提供細菌裂解環(huán)境。
Foregene Protease：在Buffer ML1的環(huán)境下酶解細菌樣本。
Lysozyme：消化革蘭氏陽性菌細胞壁。
Buffer ML2：失活Foregene Protease，并提供DNA上柱環(huán)境。
Buffer PW：去除DNA中的蛋白質、RNA等雜質。
Buffer WB：去除DNA中的殘留的鹽離子。
Buffer EB：洗脫純化柱膜上的DNA。
Buffer TE：用于配制100mg/ml Lysozyme的溶液
DNA-only Column：特異吸附裂解產(chǎn)物中的DNA。
產(chǎn)品信息
型號 | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個樣品 | 制備時間 | ~60 min (24個樣品) |
離心機 | 臺式離心機 | 細菌裂解物分離 | 離心分離 |
離心柱液體盛裝量 | 800 μL | 純化柱DNA承載量 | 80 μg |
洗脫體積 | 100-200 μL | 細菌處理量 | ≤3ml(培養(yǎng)16-20hr細菌) |
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻
PolymeraseChain Reaction using “V” Shape Thermal Cycling Program
Rong Chen, Xue Lu, Mei Li, Gangyi Chen, Yun Deng, Feng Du, Juan Dong, XinHuang, Xin Cui, Zhuo Tang
中國科學院成都生物研究所天然產(chǎn)物研究中心
Theranostics ( IF 8.537 ) PubDate : 2019-02-28 , DOI: 10.7150/thno.31986
文章鏈接：http://www.thno.org/v09p1572.pdf
Antibacterial activityof Lactobacillus plantarumisolated from Tibetan yaks
Lei Wang, Hui Zhang, Mujee Ur Rehman, Khalid Mehmood, Xiong Jiang, MujahidIqbal ,Xiaole Tong, Xing Gao, Jiakui Li
華中農業(yè)大學獸醫(yī)學院
Microbial Pathogenesis (IF 2.332 ) PubDate : 2018-02, DOI：10.1016/j.micpath.2017.12.077
文章鏈接：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0882401017314559
Dynamic changes ofbacterial communities and nitrite character during northeastern Chinesesauerkraut fermentation
Qi Zhou, Shizhu Zang, Zinan Zhao, Xinli Li
中國大連醫(yī)科大學生物技術系
Food Science andBiotechnology( IF 0.786 )Pub Date : 2018-02, DOI：10.1007/s10068-017-0279-8
文章鏈接：https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs10068-017-0279-8
Orally AdministeredChitooligosaccharides Modulate Colon Microbiota in Normal and Colitis Mice
Ting Long, Zhi-Jun Yu, Jun Wang, Jia Liu, Bing-Shu He
武漢科技大學醫(yī)學院藥學系
International Journal ofPharmacology( IF 0.765 ) PubDate : 2018-01-15, DOI：10.3923/ijp.2018.291.300
文章鏈接：https://scialert.net/abstract/?doi=ijp.2018.291.300
Clinical analysis ofcases of neonatal Streptococcus agalactiae sepsis
S.J. Zeng, X.S. Tang, W.L. Zhao, H.X. Qiu, H. Wang and Z.C. Feng
南方醫(yī)科大學北京總醫(yī)院臨床醫(yī)學院附屬八一兒童醫(yī)院新生兒學部
Genetics and MolecularResearch ( IF 1.013) Pub Date : 2016-06-17, DOI：10.4238/gmr.15027962
文章鏈接：http://funpecrp.com.br/gmr/year2016/vol15-2/pdf/gmr7962.pdf
Genome sequencingreveals mechanisms for heavy metal resistance and polycyclic aromatichydrocarbon degradation in Delftia lacustris strain LZ-C
Wenyang Wu, Haiying Huang, Zhenmin Ling, Zhengsheng Yu, Yiming Jiang, PuLiuXiangkai Li
中國蘭州大學生命科學學院細胞活動與應激適應教育部重點實驗室
Ecotoxicology( IF 2.706) Pub Date : 2015-11, DOI：10.1007/s10646-015-1583-9
文章鏈接: https://link.springer.com/article/10.1007/s10646-015-1583-9
MSDS
COA
提取過程中無法獲得基因組DNA
Answer
通常有多種因素會影響細菌基因組DNA產(chǎn)量，包括菌種來源、樣本保存條件、消化程度、操作等。
1. 細菌樣本保存不當或保存時間太長，導致基因組DNA已經(jīng)降解。
建議：細菌樣本保存于-80℃；盡量使用新近培養(yǎng)的細菌進行基因組DNA的提取。
2. 細菌細胞壁沒有破碎。
建議：革蘭氏陽性菌細胞壁很厚，需要使用Lysozyme(100mg/mL)在37℃環(huán)境中進行細胞壁的降解。
3. Foregene Protease保存不當，導致其活性失活而不能消化細菌細胞。
建議：確認Foregene Protease保存條件或者更換新的Foregene Protease進行酶解反應。
4. 試劑盒保存不當或存放時間太長，導致試劑盒里面某些組分失效。
建議：購置新的細菌基因組DNA提取試劑盒進行相關操作。
5. Buffer WB沒有添加無水乙醇。
建議：確認Buffer WB中添加正確體積的無水乙醇。
6. 洗脫液沒有正確滴加到硅膠膜上。
建議：將65℃預熱的洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
提取獲得低產(chǎn)量基因組DNA
Answer
1. 樣本使用量過少。
建議：根據(jù)細菌的培養(yǎng)情況來確定細菌用量，有些細菌培養(yǎng)后濃度稀，可以適當增加菌液用量。
2. 革蘭氏陽性菌破壁不完全。
建議：可適當增加Lysozyme用量或適當延長Lysozyme消化時間。
3. Foregene Protease保存不當，導致其活性降低或失活。
建議：確認Foregene Protease保存條件或者更換新的Foregene Protease進行酶解反應。
4. 洗脫液問題
建議：請使用Buffer EB進行洗脫；如果使用ddH2O或其他洗脫液，確認洗脫液的pH值在7.0-8.5之間。
5. 洗脫液沒有正確滴加
建議：請將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
6. 洗脫液體積太少
建議：請按說明書上要求使用洗脫液進行基因組DNA洗脫，最少不要低于100μL。
提取獲得低產(chǎn)量基因組DNA
Answer
1. 樣本使用量過少。
建議：根據(jù)細菌的培養(yǎng)情況來確定細菌用量，有些細菌培養(yǎng)后濃度稀，可以適當增加菌液用量。
2. 革蘭氏陽性菌破壁不完全。
建議：可適當增加Lysozyme用量或適當延長Lysozyme消化時間。
3. Foregene Protease保存不當，導致其活性降低或失活。
建議：確認Foregene Protease保存條件或者更換新的Foregene Protease進行酶解反應。
4. 洗脫液問題
建議：請使用Buffer EB進行洗脫；如果使用ddH2O或其他洗脫液，確認洗脫液的pH值在7.0-8.5之間。
5. 洗脫液沒有正確滴加
建議：請將洗脫液滴加到硅膠膜的正中間，并在室溫放置5分鐘增加洗脫效率。
6. 洗脫液體積太少
建議：請按說明書上要求使用洗脫液進行基因組DNA洗脫，最少不要低于100μL。
提取獲得基因組DNA純度低
Answer
基因組DNA純度低會導致下游實驗的失敗或效果不理想，如：酶切不開，PCR得不到目的基因片段等。
1. 雜蛋白污染、RNA污染、內毒素污染。
分析：沒有使用Buffer PW洗滌純化柱；Buffer PW洗滌純化柱沒有使用正確的離心轉速。
建議：在上清液過柱時盡量保證上清液中無沉淀；務必按說明書進行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
2. 雜質離子污染。
分析：省略了Buffer WB洗滌純化柱或者只洗滌了一次，導致殘留的離子污染。
建議：務必按說明書使用Buffer WB洗滌2次，以盡量去除殘留的離子。
3. RNA酶污染。
分析：Buffer中添加了外源的RNA酶；Buffer PW洗滌操作不正確，導致RNA酶殘留，影響下游RNA實驗操作，如：體外轉錄等。
建議：Foregene系列核酸提取試劑盒無需額外添加RNA酶即可去除RNA，Bacterial Tail DNA Mini Kit里面所有試劑均無需添加RNA酶；務必按說明書進行Buffer PW洗滌純化柱，并且此步驟不能省略。
4. 乙醇殘留。
分析：Buffer WB洗滌純化柱后，沒有進行空管離心操作。
建議：按說明書進行正確的空管離心操作。
5. 其他雜質污染。
分析：細菌使用量過多，以至細菌破壁或消化不完全。
建議：明確細菌用量，一般情況下，>3mL菌液分多個純化柱進行處理。
