| 產(chǎn) 品 名 稱 | 膠回收試劑盒 Gel Extraction Kit |
| 貨 號(hào) | DE-02011 |
| 規(guī) 格 | 50T |
| 價(jià) 格 | ￥253.00 |
| 描 述 | 快速從瓊脂糖凝膠中高效率的回收20bp-10kb的DNA片段 |
產(chǎn)品介紹
該試劑盒采用本公司研制的離心柱和配方，可以從瓊脂糖凝膠中高效率的回收高純度DNA片段。試劑盒回收DNA片段范圍廣，一般條件下可以回收30bp-10kb的DNA片段。最小可以使用30μL洗脫液，提高回收DNA濃度。
試劑盒操作便捷，步驟少，只需數(shù)次離心即可同時(shí)處理多個(gè)樣品，15分鐘即可獲得高純回收DNA片段。
試劑盒應(yīng)用
該試劑盒適用于回收瓊脂糖凝膠中的DNA片段(30bp-10kb)。
純化DNA的應(yīng)用
膠回收試劑盒回收獲得的DNA純度高，可用于常規(guī)分子生物學(xué)操作，如：酶切、連接、PCR、測序等實(shí)驗(yàn)。
DNA回收得率和純度
鑒于純化柱的特性，對(duì)于不同片段的DNA其吸附能力以及洗脫效率也不一樣，因此膠回收的效率會(huì)有所不同。一般的膠回收效率見下表：
凝膠種類 | DNA片段回收效率* | OD260/280 | |||
30-60bp | 60bp-7kb | 7-10kb | >10kb | ||
TAE | ~50% | 70-80% | 60-70% | <50% | 1.7-7.9 |
TBE | ~40% | 60-70% | 50-60% | <40% | 1.7-1.9 |
*經(jīng)測試，該試劑盒對(duì)于23kb的DNA片段回收效率在20%左右。
試劑盒內(nèi)容
Buffer GE：在60℃條件下溶解凝膠塊，使DNA片段從凝膠中釋放出來。
Buffer WB1：去除DNA中的殘留的鹽離子。
Buffer EB：洗脫純化柱膜上的DNA。
DNA-Only Column：特異吸附凝膠中的DNA片段。
產(chǎn)品信息
型號(hào) | 離心柱型 | 純化組件 | Foregene離心柱、試劑 |
通量 | 1-24個(gè)樣品 | 制備時(shí)間 | ~15 min |
離心機(jī) | 臺(tái)式離心機(jī) | 離心柱液體盛裝量 | 800 μL |
| 純化柱DNA承載量 | 30 μg | 單個(gè)凝膠柱處理量 | ≤ 400 mg |
洗脫體積 | 30-50 μL | 回收效率 | 70-80% |
*：DNA片段的回收效率與片段大小、凝膠種類(TAE、TBE)、切膠塊大小、洗脫體系等因素相關(guān)。因此，實(shí)際操作中，回收效率會(huì)在比70-80%略低。
操作流程
說明書
產(chǎn)品文獻(xiàn)
A long noncoding RNA distributed in both nucleus and cytoplasm operates in the PYCARD-regulated apoptosis by coordinating the epigenetic and translational
Hui Miao, Linlin Wang, Haomiao Zhan, Jiangshan Dai, Yanbo Chang, Fan Wu, Tao Liu, Zhongyu Liu, Chunfang Gao, Ling Li, Xu Song
四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院功能基因組學(xué)與生物信息學(xué)中心
教育部生物資源與生態(tài)環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室
Plos Genetics( IF 5.54) Pub Date:2019-05-14,DOI:10.1371/journal.pgen.1008144
文章鏈接：https://journals.plos.org/plosgenetics/article?id=10.1371%2Fjournal.pgen.1008144#sec011
MSDS
COA
回收不到DNA片段或回收效率低
Answer
通常會(huì)有多種因素影響膠回收效率，比如：凝膠種類(TAE/TBE)、DNA片段初始量、凝膠塊的溶解程度、洗脫體積等。
可能存在的原因如下：
1. 電泳緩沖液不新鮮。
建議：電泳前，更換新的電泳緩沖液。
2. 切膠的時(shí)候沒有將目標(biāo)DNA條帶切下。
建議：確認(rèn)切下的凝膠中含有目標(biāo)DNA片段，盡量將所有的目標(biāo)DNA都包含在切下的凝膠中以便獲得更高的回收率。
3. 溶膠液(Buffer GE)加入比例不合適。
建議：正確稱量切下的凝膠塊的重要，嚴(yán)格按照說明書的提示，加入正確體積的溶膠液。
4. 凝膠塊溶解不充分。
建議：在60℃溶膠時(shí)，每間隔2-3min震蕩混勻，確保凝膠塊完全溶解。DNA片段會(huì)殘留在任何沒有溶解的凝膠塊中。
5. 切下膠塊過大(>400mg)。
建議：單個(gè)離心柱能最多能從400mg凝膠中回收到70-80%的目的片段。若切下膠塊超過400mg，需使用多個(gè)離心柱進(jìn)行回收。
6. Buffer WB1中忘記添加無水乙醇。
建議：參照說明書或試劑瓶上標(biāo)簽在Buffer WB1中添加正確體積的無水一處并混勻。
7. 洗脫液添加不正確。
建議：確認(rèn)Buffer EB或ddH2O滴加到了純化柱膜中間位置；尤其是進(jìn)行小體積洗脫的時(shí)候，一定要確定洗脫液滴加的位置正確，否則會(huì)導(dǎo)致無法回收到DNA。
8. 洗脫液使用不正確。
建議：有些特殊需求的實(shí)驗(yàn)需要使用純水洗脫，請(qǐng)確定洗脫液的pH在7.0-8.5之間，否則將很大程度上影響洗脫效率。
回收的DNA影響下游實(shí)驗(yàn)
Answer
1. 洗脫下來的DNA片段中鹽離子濃度過高。
建議：結(jié)合DNA片段的純化柱在加入700μL Buffer WB1后，在室溫放置5min再離心，以便能徹底的去除鹽離子。
2. 洗脫下來的DNA片段中含有乙醇?xì)埩簟?/span>
建議：BufferWB1洗滌純化柱后，12,000rpm (~13,400 ×g )空管離心2min一定不能省略；如果還有乙醇?xì)埩艨梢詫⒓兓谑覝胤胖?/span>2-5min再進(jìn)行洗脫或者以13,400rpm (~17,000 ×g )離心2min。
3. 洗脫液中含有瓊脂糖污染。
建議：凝膠塊沒有完全溶解。如果凝膠塊比較大，可以預(yù)先將膠塊切小，并適當(dāng)延長溶膠時(shí)間以確保凝膠塊完全溶解。
