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第一鏈cDNA合成預(yù)混體系Master Premix

高效的逆轉(zhuǎn)錄體系,只需25min即可完成第一鏈cDNA的合成。

高靈敏的逆轉(zhuǎn)錄體系,pg級別的模板也可以得到高質(zhì)量的cDNA。

逆轉(zhuǎn)錄體系熱穩(wěn)定性高,該體系反應(yīng)溫度可高達(dá)50℃,具有良好的逆轉(zhuǎn)錄性能。

即使不純的RNA樣品(酒精可達(dá)45%,胍鹽可達(dá)750mM)也可進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

產(chǎn) 品 名 稱

第一鏈cDNA合成預(yù)混體系Master Premix

RT EasyTM I

貨    號

RT-01011

RT-01012

規(guī)    格

25 × 20 μL rxns

100  × 20 μL rxns

價    格

424.00

1,456.00

描    述

便捷的逆轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系Master Premix,逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物適用于克隆全長cDNA,qPCR等。

產(chǎn)品介紹

本公司的2× RT EasyTM Mix合成第一鏈cDNA的溫度高達(dá)50,有利于復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)RNA模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

實(shí)驗(yàn)室純化獲得的RNA常有酒精及胍鹽殘留,對大多數(shù)逆轉(zhuǎn)錄酶有很強(qiáng)的抑制性,導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄效果不理想或逆轉(zhuǎn)錄效率低。福際2× RT EasyTM Mix對酒精和胍鹽顯示出極高的耐受性,RNA樣品中酒精的最高耐受為45%,胍鹽的最高耐受為750mM。即使不純的RNA也可用福際2× RT Mix進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。獨(dú)特的反應(yīng)體系,使得RT反應(yīng)更加簡便、快捷、高效,25min即可完成第一鏈cDNA的合成。

此產(chǎn)品可與Foregene公司的熒光定量產(chǎn)品Real Time PCR EasyTM 配合使用,能獲得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。


試劑盒應(yīng)用

v 常規(guī)RT-PCR。

v 合成cDNA,用于克隆和表達(dá)研究。

v 轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的引物延伸法分析。

v RACE(cDNA末端快速擴(kuò)增)

v 線性RNA擴(kuò)增。

v 芯片標(biāo)記


儲存條件

試劑盒保存于-20。產(chǎn)品收到后立即存放于-20恒溫冰箱中。如果存儲條件適當(dāng),產(chǎn)品在1年有效期內(nèi)不會降低任何性能。



劑盒內(nèi)容

2× RT EasyTM MixForegene Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、dNTPs、反應(yīng)緩沖液、優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑等。

Random Primer (50μM)6個寡聚核苷酸的隨機(jī)引物,其濃度為50μM。

Oligo(dT)18 Primer (50μM)具有18dT的引物,其濃度為50μM。


Foregene Reverse Transcriptase

Foregene逆轉(zhuǎn)錄酶能夠提供高效、特異性強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。逆轉(zhuǎn)錄酶表現(xiàn)出很高的親和力,并在 50°C反應(yīng)溫度條件下仍然保持良好的逆轉(zhuǎn)錄活性,能夠很好的逆轉(zhuǎn)錄其他逆轉(zhuǎn)錄酶不能處理的二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNAForegene Reverse Transcriptase 靈敏度高,使用的RNA 量范圍廣泛(0.1pg≤RNA≤1μg)


RT Mix受性

經(jīng)測試分析,RT EasyTM Mix對酒精和胍鹽顯示出極高的耐受性。實(shí)驗(yàn)室純化獲得的RNA常有酒精及胍鹽殘留,對逆轉(zhuǎn)錄有很強(qiáng)的抑制性,導(dǎo)致逆轉(zhuǎn)錄效果不理想或逆轉(zhuǎn)錄效率低。Foregene RT Easy系列產(chǎn)品對酒精及胍鹽的耐受能力使得逆轉(zhuǎn)錄更容易、高效率的進(jìn)行。

酒精耐受性分析

11

胍鹽耐受性分析

12

RNA模板濃度

(0.1pg-5μg total RNAor 0.01pg-0.5μg mRNA) /20 μL體系



  • 非特異性擴(kuò)增

    Answer

    1.    引物設(shè)計(jì)不合理

    建議:按照引物設(shè)計(jì)原則進(jìn)行引物的設(shè)計(jì)。

    2.    基因組殘留。

    建議:使用含有基因組去除的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒如(Cat.No.RH-01031)或者設(shè)計(jì)跨內(nèi)含子引物。


  • RT-QPCR無擴(kuò)增信號

    Answer

    1.     RNA被降解。

    建議:提取RNA的材料盡量新鮮,應(yīng)用高質(zhì)量高純的的RNA。

    2.    RNA含有抑制劑。

    建議:逆轉(zhuǎn)錄抑制劑一般包括SDS、胍鹽、EDTA等,建議通過70%的乙醇對RNA沉淀進(jìn)行清洗,除去抑制劑。

    3.    引物設(shè)計(jì)問題。

    建議:按照引物設(shè)計(jì)原則,重新設(shè)計(jì)引物進(jìn)行檢查。


  • 空白對照出現(xiàn)目的條帶

    Answer

    1.    操作工具或試劑污染。

    建議:實(shí)驗(yàn)所有試劑或器材均應(yīng)高壓滅菌。操作時應(yīng)小心輕柔,防止將DNA樣品吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。

    2.    PCR反應(yīng)體系制備時發(fā)生污染。

    建議:操作時進(jìn)行必要的防護(hù)措施,比如:戴乳膠手套,使用帶濾芯的槍頭。使用防污染體系的real time PCR Mix。

    3.    引物出現(xiàn)降解。

    建議:使用SDS-PAGE電泳檢測引物是否發(fā)生降解,更換新的引物進(jìn)行熒光檢測實(shí)驗(yàn)。


相關(guān)產(chǎn)品

COA