產品名稱 | 植物葉片直接PCR試劑盒 Plant Leaf Direct PCR Kit | ||
貨 號 | TP-02111 | TP-02113 | |
規(guī) 格 | 200 T | 2000 T | |
價 格 | ￥970.00 | ￥5,826.00 | |
| 描 述 | 直接使用葉片或葉片裂解液作為模板進行PCR擴增，無需單獨抽提DNA，快速，靈敏度高，適合快速大規(guī)?；驒z測；試劑盒包含裂解液/PCR Mix | ||
產品介紹
本產品采用獨特的裂解緩沖液體系，能夠快速的從多糖多酚含量低植物(如：水稻、小麥、煙草、玉米、大豆、油菜等)的葉片樣本中釋放出基因組DNA，用于PCR反應。裂解緩沖液處理葉片時，葉片無需研磨或剪碎處理，因此特別適合大規(guī)?；驒z測。
裂解緩沖液釋放基因組DNA過程可以在5-10min內完成，不需要其他去蛋白、RNA或者次生代謝產物的過程，即可將釋放出的微量DNA作為模板進行PCR反應。
2× Leaf PCR EasyTM Mix具有很強的PCR反應抑制物耐受性，能直接以植物材料的裂解產物為模板，進行高效特異性擴增。該試劑包含公司專門針對直接PCR反應改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。與直接裂解液配合使用能夠快速簡便地對樣品進行檢測，并具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。
D-Taq DNA polymerase是為直接PCR反應專門研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase對多種PCR反應抑制劑具有極強的的耐受性、在各種復雜反應體系中均能高效擴增痕量的DNA，擴增速度可達2Kb/min，特別適合進行直接PCR反應。
根據植物樣本差異，該產品分為兩個大類：植物直接PCR試劑盒(Plant Leaf Direct PCR Kit)和多糖多酚植物直接PCR試劑盒(Plant LeafDirect PCR Plus Kit)；在PCR檢測階段，可以根據實驗需求，選用普通的2× Leaf PCR EasyTM Mix或是具有防PCR擴增產物污染作用的2× Leaf PCR EasyTM Mix(UNG)。
試劑盒應用
適用范圍：多種植物葉片。
樣本裂解釋放的DNA：僅用作PCR模板。
試劑盒可用于以下用途：轉基因植株鑒定、植物基因分型等。
試劑盒局限性
擴增片段≤1kb；超過1kb，擴增效率下降或者擴增失敗。
PCR產物如用于測序建議先進行PCR產物純化。
PCR產物可能會有點突變，如用于基因克隆，請知悉。
PCR產物3’末端隨機加A尾。
試劑盒內容
Buffer P1：提供植物葉片裂解反應所需的環(huán)境。
Buffer P2：中和裂解產物，使其不影響后續(xù)PCR反應。
2× Leaf PCR EasyTM Mix：包含福際生物特別改造的Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑等。PCR反應時，只需將適當?shù)牧呀饣旌弦?、引物?/span>ddH2O添加到2× Leaf PCR EasyTM Mix中即可用于PCR反應。
6× DNA Loading Buffer：該Loading Buffer中不含有SDS。建議在進行瓊脂糖凝膠電泳時，配搭使用試劑盒附贈的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的電泳結果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否則在電泳時會在泳道中有一大團拖尾亮光，影響實驗結果。
儲存條件
全程低溫冰盒運輸，保證試劑盒Part I、Part II處于＜4℃狀態(tài)。
本試劑盒Part I保存在2-8℃。
v 試劑Buffer P1、Buffer P2、6× DNA Loading Buffer在干燥條件下，可保存12個月；如需保存更長時間可置于2–8℃。
本試劑盒Part II保存在-20℃。
v 試劑2× Leaf PCR EasyTM Mix，在-20℃條件下可保存12個月；若頻繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天內用完)。
操作流程
說明書
產品文獻
MSDS
COA
正對照、待測樣本均無條帶
Answer
在試劑盒的使用過程中往往會遇到許多問題，比如：沒有PCR擴增產物、PCR特異性差等，以下就分別對使用植物葉片直接PCR系列可能會遇到的問題進行分析。建議在進行直接PCR的同時設置陽性對照或陰性對照以便后續(xù)分析實驗結果。
1. PCR反應體系或反應條件不合適。
建議：使用梯度PCR摸索PCR最佳反應條件。
2. PCR試劑保存不當失去活性。
建議：2× Leaf PCR EasyTM Mix應保存于-20℃，使用時避免反復凍融。若使用頻繁，可在4℃短時間存放。
3. 引物設計問題。
建議：嘗試重新設計引物進行檢查。
正對照有目的條帶，待測樣本無條帶或條帶弱
Answer
1. 葉片中多糖多酚含量較高，裂解混合液呈棕黃色甚至棕紅色。
建議：使用多糖多酚植物葉片直接PCR試劑盒(Plant Leaf Direct PCR Plus Kit)。
2. 裂解液、中和液加入比例不當，裂解混合液影響PCR體系的pH值。
建議：正常條件下，中和后的裂解混合液的pH應該在7-8左右(裂解產物和Buffer P2嚴格按照1:1的量進行中和)。
3. 樣本裂解混合液保存不當或保存時間過久，DNA基因組已經降解。
建議：裂解液可在4℃保存5天，盡量使用新制備的裂解液混合液進行PCR。
4. 裂解混合液中抑制物過多。
建議：在PCR反應體系5-20%范圍內優(yōu)化模板加入量。
5. PCR循環(huán)數(shù)不足。
建議：適當增加PCR的循環(huán)數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。因為模板復雜，一般PCR反應要比用純化的DNA模板多5-10個循環(huán)為佳。
非特異性擴增
Answer
1. 退火溫度偏低。
建議：適當提高退火溫度。
2. PCR循環(huán)數(shù)過多。
建議：適當降低循環(huán)次數(shù)，推薦在35-40循環(huán)為佳。
3. 引物濃度偏高。
建議：適量降低引物用量。通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可以在0.1-0.5μM范圍內調整引物濃度。
4. 模板加入量過多。
建議：配制PCR反應體系時，適量減少模板加入量。
空白對照出現(xiàn)目的條帶
Answer
1. 操作工具或試劑污染。
建議：實驗所有試劑或器材均應高壓滅菌。實驗時應規(guī)范操作，避免在加樣操作中溶液倒吸或飛濺。
2. 樣本間交叉污染。
建議：每個取樣器只對一個樣本使用；或取完一個樣本后，將取樣器刃口或與樣本直接接觸的部位浸入2%的次氯酸鈉溶液中，反復涮洗數(shù)次進行清洗，然后用干凈的紙巾擦干殘液后再進行使用。
3. PCR產物污染。
建議：如果實驗室檢測同類型樣本多，最好使用UNG防PCR產物污染系統(tǒng)的試劑盒進行實驗。
